[發明專利]用于測定抗原的試劑以及抗原的測定方法

有效

• 申請號: 200580044428.5
• 申請日: 2005-12-22
• 公開（公告）號: CN101088010A
• 公開（公告）日: 2007-12-12
• 發明（設計）人: 本莊由紀;秋元優夏;小谷一夫;矢后弘和;松尾正直;宮崎修;齋藤和典
• 申請（專利權）人: 第一化學藥品株式會社
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N33/577;G01N33/574
• 代理公司: 北京林達劉知識產權代理事務所
• 代理人: 劉新宇;李茂家

技術領域

本發明涉及通過免疫凝集反應測定抗原的測定試劑和抗原的測定方法。詳細地說，涉及一種通過膠乳免疫比濁法(LTIA法)測定抗原時，通過調節游離型抗原(例如fPSA)和與被測物中的共存物質形成了復合體的復合體型抗原(例如PSA-ACT)的反應性來進行測定的抗原測定試劑和測定方法。?

背景技術

前列腺癌是男性中出現的惡性疾病，尤其在美國和日本，是急劇增加的腫瘤。前列腺癌是增殖緩慢的腫瘤，且放射療法、抗男性激素療法易奏效，由于具有上述特征，因此早期發現是重要的課題。?

在此，由前列腺上皮細胞分泌并且也由前列腺癌細胞產生的前列腺特異抗原(下面簡稱為PSA)是絲氨酸蛋白酶的一種，是分子量為33000～34000道爾頓的糖蛋白。另外，PSA有在血中與蛋白酶抑制劑結合的復合體型和非結合的游離型前列腺特異抗原(下面稱為fPSA)，但血中的P?SA大多是復合體型，有α1-抗糜蛋白酶復合前列腺特異抗原(下面稱為PSA-ACT)和α2-巨球蛋白復合前列腺特異抗原等。其中，可以用免疫法測定的是fPSA和P?SA-ACT兩種，目前在日本被實用化的測定超過20種血清中的PSA總量的試劑盒中，有以下問題：因被測液不同，其測定值與真值背離的程度不同。其主要原因被認為是由于每個試劑盒中測定試劑對fPSA和PSA-ACT的反應性不同所導致的。?

即，在免疫法中，利用使用膠乳等的凝集反應的所謂免疫?凝集反應測定法中，抗原抗體反應是在1個階段進行的，因此，存在如下問題：PSA的單克隆抗體與fPSA的反應性和PSA的單克隆抗體與PSA-ACT的反應性不同，其結果，測定結果產生誤差。?

作為解決這種問題的現有技術，例如，專利文獻1中記載：在fPSA的可與α1-抗糜蛋白酶結合的區域結合抗體，使fPSA和PSA-ACT的分子量接近，使抗原決定部位的數目均勻，從而使fPSA對PSA的抗體的反應性和PSA-ACT對PSA的抗體的反應性接近，從而可以以等摩爾反應性測定用該抗體致敏的載體和兩種PSA。?

專利文獻1：日本特開2001-311733號公報?

發明內容

發明要解決的課題?

但是，上述現有的測定方法存在如下問題：需要預先僅與fPSA反應的特殊的抗體。另外，必須進行2個階段的反應，即，在進行使用該特殊抗體與fPSA反應的前處理之后，使用用兩PSA的抗體致敏的載體來測定PSA的總量。?

因此，期待開發出更簡便并正確地測定PSA的總量的方法。另外，只要沒有特別說明，PSA的測定是指測定PSA的總量。?

用于解決問題的方法?

本發明人們對使用免疫凝集法的抗原的測定法進行深入研究，結果發現：測定用試劑，其組成包含至少三種抗體，這些抗體對包含于被測物中的游離型抗原以及由該游離型抗原與共存物質形成復合體的復合體型抗原的識別部位不同，該抗體中的至少兩種抗體被致敏到載體上并且與兩抗原反應，采用上述組成時，通過調節各抗體的混合比例，可調節該兩抗原的反應?性，從而完成了本發明。?

即，本發明具有以下的組成。?

(1)一種抗原的測定試劑，其用于通過免疫凝集反應測定抗原，?

其包含至少三種抗體，這些抗體對包含于被測物中的游離型抗原以及由該游離型抗原與共存物質形成復合體的復合體型抗原的識別部位不同，?

該抗體中的至少兩種抗體被致敏到載體上并且與該兩抗原反應，?

該抗體的混合比例被調節成與該兩抗原顯示規定的摩爾反應性。?

(2)根據前述(1)所述的抗原的測定試劑，其中，規定的摩爾反應性是等摩爾反應性。?

(3)根據前述(1)或(2)所述的抗原的測定試劑，其中，抗體是三種。?

(4)根據前述(1)～(3)任一項所述的抗原的測定試劑，其中，全部抗體都被致敏到載體上。?

(5)根據前述(1)～(4)任一項所述的抗原的測定試劑，其中，被一種抗體致敏的載體與被另一種抗體致敏的載體的粒徑不同。?

(6)根據前述(1)～(5)任一項所述的測定試劑，其中，共存物質為蛋白質。?

(7)根據前述(6)所述的測定試劑，其中，蛋白質是通過與游離型抗原形成復合體來阻礙該游離型抗原所具有的活性的物質、或者是白蛋白。?

(8)根據前述(7)所述的測定試劑，其中，通過與游離型抗原形成復合體來阻礙該游離型抗原所具有的活性的物質是?蛋白酶抑制劑或游離型抗原的轉運蛋白。?