[發明專利]S1P受體激動劑的劑量方案

無效

• 申請號: 200580040968.6
• 申請日: 2005-11-28
• 公開（公告）號: CN101068536A
• 公開（公告）日: 2007-11-07
• 發明（設計）人: J·M·科瓦里克;S·阿佩爾－丁厄曼斯
• 申請（專利權）人: 諾瓦提斯公司
• 主分類號: A61K31/135
• 分類號: A61K31/135;A61P37/06
• 代理公司: 北京市中咨律師事務所
• 代理人: 黃革生;林柏楠

本發明涉及S1P受體調節劑或激動劑的劑量方案，特別是在治療移植 患者或患有自身免疫性疾病或病癥的患者的過程中的劑量方案。

S1P受體調節劑或激動劑是作為激動劑于一種或多種磷酸鞘氨醇-1受 體、例如S1P1至S1P8發信號的化合物。與S1P受體結合的激動劑例如可 以導致細胞內異源三聚體G-蛋白解離成Gα-GTP和Gβγ-GTP，和/或被激 動劑占據的受體的磷酸化增加和下游信號途徑/激酶的活化。

對于用于治療哺乳動物、尤其是人的各種病癥的藥物的制備而言，S1P 受體調節劑或激動劑是有價值的化合物。例如，已經在大鼠(皮膚、心、肝、 小腸)、狗(腎)和猴子(腎)模型中證明了其在移植中的功效。與環孢菌素A 的聯合試驗顯示在大鼠的皮膚和心臟移植模型以及猴子的腎移植模型中存 在協同作用。S1P受體激動劑或調節劑與依維莫司(everolimus)聯合可延長 心臟(大鼠)和腎(猴子)同種移植物的存活。由于其免疫調節功效，S1P受體 調節劑或激動劑還可用于治療炎癥和自身免疫疾病。在以下公開物中可以 發現S1P受體激動劑的其它特性：

BrinkmannV，Chen?S，Feng?L等人(2001)，“FTY720在不誘導全身免 疫抑制的情況下改變淋巴細胞歸巢并保護同種移植物”，Transplant?Proc； 33：530-531。

BrinkmannV，Pinschewer?D，Feng?L等人(2001)，“FTY720：通過改變 淋巴細胞運輸而導致同種移植物保護(綜述)”，Transplantation； 72：764-769。

Pinschewer?DD，Ochsenbein?AF，Odermatt?B等人(2000)，“FTY720免 疫抑制在不影響感應、膨脹和存儲的情況下損害了效應器T-細胞外周歸 巢”，J?Immunol；164：5761。

Yanagawa?Y，Sugahara?K，Kataoka?H等人(1998)，“一種新型免疫抑制 劑FTY720通過加速大鼠體內淋巴細胞歸巢而誘導循環的成熟淋巴細胞的 隔離II.FTY720通過降低T細胞浸潤至移植物但不產生細胞因子而延長 皮膚同種移植物的存活”，J?Immunol.；160(11)：5493-9。

現已令人驚訝地發現：特定的劑量方案、例如負荷劑量(loading?dose) 將提供進一步預想不到的益處。

可以在以下試驗中測定S1P受體激動劑或調節劑對各個人S1P受體的 結合親合性：

就化合物對人S1P受體S1P₁、S1P₂、S1P₃、S1P₄和S1P₅的S1P受體 激動劑或調節劑活性進行了試驗。通過對化合物誘導的GTP[γ-³⁵S]與膜蛋 白的結合進行定量來對功能受體活化進行評估，所述膜蛋白由穩定表達適 合人S1P受體的被轉染的CHO或RH7777細胞制得。所用的試驗技術是 SPA(閃爍親近測定法)。簡言之，將用DMSO溶解的化合物系列稀釋，并 在50mM?Hepes、100mM?NaCl、10mM?MgCl₂、10μM?GDP、0.1％無脂肪 BSA和0.2nM?GTP[γ-³⁵S](1200Ci/mmol)存在下將其加入到SPA-小珠 (Amersham-Pharmacia)固定的表達S1P受體的膜蛋白中(10-20μg/孔)。在 96孔微量滴定板中于RT培養120分鐘后，通過離心步驟分離未結合的 GTP[γ-³⁵S]。用TOPcount板式讀數器(Packard)對由膜結合的GTP[γ-³⁵S] 觸發的SPA小珠的熒光進行定量。用標準曲線擬合軟件計算EC₅₀。在該 試驗中，S1P受體調節劑或激動劑對S1P受體優選具有<50nM的結合親合 性。

優選的S1P受體激動劑或調節劑是例如除其S1P結合性質外還具有加 速淋巴細胞歸巢性質的化合物，例如引起淋巴細胞減少——由淋巴細胞從 循環向次級淋巴組織的再分配、優選可逆再分配而產生——但是不會引起 廣泛性免疫抑制的化合物。原初細胞被隔離；血液的CD4和CD8T-細胞 以及B-細胞被刺激而遷移到淋巴結(LN)和集合淋巴小結(PP)中。

可以在以下血液淋巴細胞消耗試驗中測量其淋巴細胞歸巢性：