[發明專利]培養哺乳動物味細胞的方法

無效

• 申請號: 200580040235.2
• 申請日: 2005-10-13
• 公開（公告）號: CN101065479A
• 公開（公告）日: 2007-10-31
• 發明（設計）人: N·E·羅森;M·H·厄茲代內爾
• 申請（專利權）人: 蒙奈爾化學感覺中心
• 主分類號: C12N5/00
• 分類號: C12N5/00
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所
• 代理人: 李瑛

1.培養哺乳動物味細胞的方法，包括：

a.在合適的培養基中和有涂層的細胞培養容器上培養味細胞，和

b.從第一次更換培養基開始，以至少約5天的間隔更換培養基。

2.根據權利要求1的方法，其中所述味細胞包括味覺感受器細胞。

3.根據權利要求1的方法，其中所述細胞培養基包括含有15-20％MCDB?153、10％FBS、10ng/ml胰島素和抗生素的Iscove氏培養基。

4.根據權利要求1的方法，其中所述細胞培養容器涂蓋了膠原。

5.分離并培養哺乳動物味細胞的方法，包括：

a.分離舌上皮，其中將舌上皮中的味細胞暴露于水解蛋白酶的時間長度最小化，

b.在合適的細胞培養基中和有涂層的細胞培養容器上孵育分離的味細胞上皮片，和

c.從第一次更換培養基開始，以至少5天的間隔更換培養基。

6.權利要求5的方法，其中味細胞暴露于蛋白水解酶的時間長度約為30分鐘或更短。

7.權利要求5的方法，其中所述味細胞包括味覺感受器細胞。

8.權利要求5的方法，其中所述細胞培養基包括含有15-20％MCDB153、10％FBS、10ng/ml胰島素和抗生素的Iscove氏培養基。

9.權利要求5的方法，其中所述細胞培養容器涂蓋了膠原。

10.根據權利要求1的方法培養的味細胞。

11.根據權利要求10的細胞，其中所述細胞是味覺感受器細胞。

12.權利要求11的細胞，其中所述細胞應答味覺刺激物。

13.權利要求10的細胞，將其在約37℃培養超過10天。

14.權利要求10的細胞，其中將所述細胞在約18-37℃培養超過20天。

15.權利要求10的味細胞的培養物。

16.根據權利要求5的方法分離并培養的味細胞。

17.根據權利要求16的細胞，其中所述細胞是味覺感受器細胞。

18.權利要求17的細胞，其中所述細胞應答味覺刺激物。

19.權利要求16的細胞，將其在約37℃培養超過10天。

20.權利要求16的細胞，其中將所述細胞在約18-37℃培養超過20天。

21.權利要求16的味細胞的培養物。

22.維持味細胞的方法，包括在含有約300-320毫滲摩的摩爾滲透壓濃度和約7.0至約7.3pH的緩沖液中維持味細胞。

23.在細胞培養物中分裂超過48小時的哺乳動物味覺感受器細胞。

24.權利要求23的細胞，其中所述細胞在細胞培養物中分裂超過約5天。

25.權利要求23的細胞，其中所述細胞在細胞培養物中分裂超過約2周。

26.轉染的培養的哺乳動物味細胞。

27.權利要求26的細胞，其中用載體DNA轉染所述細胞。

28.權利要求27的細胞，其中所述載體DNA包括病毒載體DNA或質粒載體DNA。

29.轉染培養的味細胞的方法，包括使培養的哺乳動物味細胞接觸核酸。

30.權利要求29的方法，其中所述核酸包括載體DNA。

31.權利要求30的方法，其中所述載體DNA包括病毒載體DNA或質粒載體DNA。

32.測定對候選味覺刺激物的味覺應答的方法，包括：

a.將培養的味細胞暴露于候選味覺刺激物，和

b.將所述味細胞對候選味覺刺激物的一種或多種細胞應答與培養的味細胞對標準味覺刺激物的應答相比較，

其中培養的味細胞對候選味覺刺激物與對標準味覺刺激物相同的細胞應答表示候選味覺刺激物引起與標準味覺刺激物相同的在味細胞中的味覺應答。