[發明專利]在酮酸存在下的酶促反應

有效

• 申請號: 200580040163.1
• 申請日: 2005-11-22
• 公開（公告）號: CN101065493A
• 公開（公告）日: 2007-10-31
• 發明（設計）人: A·P·康薩爾沃;N·M·梅塔;W·斯特恩;J·P·吉利甘
• 申請（專利權）人: 尤尼基因實驗室公司
• 主分類號: C12P13/02
• 分類號: C12P13/02;C12P21/06
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司
• 代理人: 權陸軍;李連濤

1.用于體外生產酰胺化產物的方法，所述方法包括在(A)肽基 甘氨酸α-酰胺化單加氧酶和(B)反應增強化合物的存在下，使具 有游離酸形式且附著至羰基的甘氨酸殘基的前體反應，其中，所述的 反應增強化合物選自丙酮酸乙酯、丙酮酸或其鹽、丙酮酸甲酯、苯甲 酰甲酸或其鹽、2-丁酮酸或其鹽、3-甲基-2-氧代丁酸或其鹽和 2-酮戊二酸或其鹽。

2.權利要求1的方法，其中所述反應增強化合物選自丙酮酸或 其鹽。

3.權利要求2的方法，其中所述反應增強化合物是丙酮酸鈉。

4.用于體外生產酰胺化產物的方法，所述方法包括：

(A)通過在(i)肽基甘氨酸α-羥基化單加氧酶和(ii)反應增 強化合物的存在下，使具有游離酸形式且附著至羰基的甘氨酸殘基的 前體反應形成羥基化中間體，其中，所述的反應增強化合物選自丙酮酸 乙酯、丙酮酸或其鹽、丙酮酸甲酯、苯甲酰甲酸或其鹽、2-丁酮酸或其 鹽、3-甲基-2-氧代丁酸或其鹽和2-酮戊二酸或其鹽；和

(B)同時或隨后使所述中間體與路易斯堿或肽基α-羥甘氨酸α -酰胺化裂合酶反應。

5.權利要求4的方法，其中所述反應增強化合物選自丙酮酸或 其鹽。

6.權利要求5的方法，其中所述反應增強化合物是丙酮酸鈉。

7.權利要求1的方法，其中所述產物是非天然酰胺化的肽。

8.權利要求4的方法，其中所述產物是非天然酰胺化的肽。

9.權利要求1的方法，其中所述產物是酰胺化的肽，其中所述 的肽在非天然酰胺化的位置處酰胺化。

10.權利要求4的方法，其中所述產物是酰胺化的肽，其中所述 肽在非天然酰胺化的位置處酰胺化。

11.用于增強肽藥物試劑的生物利用率的方法，其中所述試劑在 非天然酰胺化的位置處酰胺化，所述非天然酰胺化通過如下步驟完 成，使具有游離酸形式的甘氨酸殘基的前體在(A)肽基甘氨酸α- 酰胺化單加氧酶和(B)反應增強化合物的存在下，在需要酰胺化的 位置處反應，其中，所述的反應增強化合物選自丙酮酸乙酯、丙酮酸或 其鹽、丙酮酸甲酯、苯甲酰甲酸或其鹽、2-丁酮酸或其鹽、3-甲基-2 -氧代丁酸或其鹽和2-酮戊二酸或其鹽。

12.用于增強肽藥物試劑的生物利用率的方法，其中所述試劑在 非天然酰胺化的位置處酰胺化，所述非天然酰胺化通過下列步驟完 成：(A)在(i)肽基甘氨酸α-羥基化單加氧酶和(ii)反應增強化 合物的存在下，使具有游離酸形式且附著至羰基的甘氨酸殘基的前體 在需要酰胺化的位置反應，因此形成羥基化中間體，其中，所述的反 應增強化合物選自丙酮酸乙酯、丙酮酸或其鹽、丙酮酸甲酯、苯甲酰甲 酸或其鹽、2-丁酮酸或其鹽、3-甲基-2-氧代丁酸或其鹽和2-酮戊 二酸或其鹽；和

(B)同時或隨后使所述中間體與路易斯堿或肽基α-羥甘氨酸α -酰胺化裂合酶反應。

13.權利要求1的方法，其中所述產物是肽。

14.權利要求4的方法，其中所述產物是肽。

15.用于體外生產α-羥基-甘氨酸的方法，所述方法包括在(i) 肽基甘氨酸α-羥基化單加氧酶和(ii)反應增強化合物的存在下，使 具有游離酸形式且附著至羰基的甘氨酸殘基的前體反應，其中，所述 的反應增強化合物選自丙酮酸乙酯、丙酮酸或其鹽、丙酮酸甲酯、苯甲 酰甲酸或其鹽、2-丁酮酸或其鹽、3-甲基-2-氧代丁酸或其鹽和2- 酮戊二酸或其鹽。

16.權利要求15的方法，其中所述反應增強化合物選自丙酮酸 或其鹽。

17.權利要求16的方法，其中所述反應增強化合物是丙酮酸鈉。