[發明專利]用于質粒DNA發酵的工藝

無效

• 申請號: 200580034956.2
• 申請日: 2005-08-16
• 公開（公告）號: CN101076597A
• 公開（公告）日: 2007-11-21
• 發明（設計）人: 亞倫·E·卡奈斯;詹姆士·A·威廉姆斯
• 申請（專利權）人: 自然科技公司
• 主分類號: C12P19/34
• 分類號: C12P19/34
• 代理公司: 北京安信方達知識產權代理有限公司
• 代理人: 陶貽豐;鄭霞

1.一種用于補料分批發酵生產共價閉合超螺旋質粒DNA的方法，它包括如下步驟：A)在補料分批階段，以降低的溫度生長含有質粒、粘粒或細菌人工染色體復制子的細菌細胞；和B)在補料分批階段限制生長速率；和C)用溫度向上轉換誘導質粒生產；和D)在升高溫度的條件下繼續生長以累積質粒產物；

籍此所述的方法提高質粒的產率。

2.如權利要求1所述的方法，其中在所述補料分批階段所述降低的溫度確保維持所述質粒產率低于大約2mg/L/OD₆₀₀。

3.如權利要求1所述的方法，其中在所述補料分批階段所述降低的溫度約為30℃。

4.如權利要求1所述的方法，其中所述溫度轉換是在36-45℃的范圍。

5.如權利要求1所述的方法，其中所述質粒含有源于ColE?1的復制起點。

6.如權利要求1所述的方法，其中所述質粒含有包括pUC?G到A突變的pMB1復制起點。

7.如權利要求1所述的方法，其中所述質粒衍生自VR1012骨架。

8.如權利要求1所述的方法，其中所述發酵培養基基本上是半合成甘油培養基。

9.一種用于發酵生產共價閉合超螺旋質粒DNA的方法，它包括如下步驟：A)在補料分批發酵培養基中生長含有源于pBR322的質粒、粘粒或細菌人工染色體復制子的細菌細胞；和B)在補料分批階段限制生長速率；和C)繼續生長以累積質粒產物；

籍此所述的方法提高質粒的產率。

10.如權利要求9所述的方法，其中所述發酵培養基基本上是半合成甘油培養基。