[發明專利]間苯三酚的生物合成和由其制備1,3－二羥基苯

無效

• 申請號: 200580034761.8
• 申請日: 2005-10-11
• 公開（公告）號: CN101084311A
• 公開（公告）日: 2007-12-05
• 發明（設計）人: 約翰·W·佛羅斯特
• 申請（專利權）人: 密歇根州州立大學托管理事會
• 主分類號: C12N15/52
• 分類號: C12N15/52;C08J5/00;C12N1/21;D06M15/693;C12P7/22;C08L21/00;C07C37/07;C09J161/06;A61K31/05;C06B21/00
• 代理公司: 北京德琦知識產權代理有限公司
• 代理人: 徐江華;王珍仙

1、一種分離的或重組的PhlD⁺酶系統，所述酶系統是PhlA^-、PhlB^-或PhlC^-中的至少一個；或者是PhlD⁺重組細胞，所述PhlD⁺重組細胞PhlA^-、PhlB^-或PhlC^-中的至少一個；或者是已經遺傳設計來提高其中PhlD表達的PhlD⁺重組細胞，其中所述酶系統和重組細胞能夠將丙二酸單酰輔酶A轉化為間苯三酚。

2、根據權利要求1所述的酶系統或細胞，其中所述酶系統或細胞是PhlA^-，PhlB^-和PhlC^-。

3、根據權利要求1所述的酶系統，其中所述系統進一步包含至少一種合成丙二酸單酰輔酶A的酶。

4、根據權利要求3所述的酶系統，其中所述合成丙二酸單酰輔酶A的酶是丙二酸單酰輔酶A合成酶、丙二酸單酰輔酶A脫羧酶和乙酰輔酶A羧化酶中的任意一個。

5、一種生產合成代謝的間苯三酚的方法，包括下列步驟：

(A)提供

(1)(a)分離的或重組的PhlD⁺酶系統，所述酶系統是PhlA^-、PhlB^-或PhlC^-中的至少一個，或

(b)PhlD⁺重組細胞，所述PhlD⁺重組細胞是PhlA^-、PhlB^-或PhlC^-中的至少一個，或

(c)已經遺傳設計來提高其中PhlD的表達的PhlD⁺重組細胞，

所述酶系統或重組細胞能夠將碳源轉化為間苯三酚；和

(2)丙二酸單酰輔酶A或其它碳源中的至少一種，其中所述其它碳源能夠被所述酶系統或重組細胞轉化為丙二酸單酰輔酶A；和

(B)接觸

(1)丙二酸單酰輔酶A和所述酶系統或重組細胞，在能由其合成間苯三酚的反應條件下，或

(2)所述其它碳源和所述酶系統或重組細胞，在能將所述碳源轉化為丙二

酸單酰輔酶A并由其合成間苯三酚的反應條件下；

從而得到合成代謝的間苯三酚。

6、根據權利要求5所述的方法，其中所述酶系統(1)(a)或細胞(1)(b)是PhlA^-，PhlB^-和PhlC^-。

7、根據權利要求5所述的方法，其中所述酶系統或重組細胞包括合成丙二酸單酰輔酶A的酶。

8、根據權利要求5所述的方法，其中所述合成丙二酸單酰輔酶A的酶是丙二酸單酰輔酶A合成酶、丙二酸單酰輔酶A脫羧酶或乙酰輔酶A羧化酶中的任意一個。

9、根據權利要求5的方法制備的間苯三酚。

10、一種分離的或重組的合成間苯三酚的酶，所述酶能夠將丙二酸單酰輔酶A轉化為間苯三酚。

11、根據權利要求10所述的酶，其中所述酶包含SEQ?ID?NO：2的氨基酸序列。

12、根據權利要求10所述的酶，其中所述酶包含與SEQ?ID?NO：2有至少70％同源性的氨基酸序列。

13、根據權利要求12所述的酶，其中所述酶包含SEQ?ID?NO：2的氨基酸序列的保守取代變體。

14、一種分離的或重組核苷酸，所述核苷酸包含至少一個編碼PhlD酶的開放閱讀框，并且是phlA^-，phlB^-或phlC^-中的至少一個。

15、根據權利要求14所述的核苷酸，其中所述核苷酸進一步包含至少一個編碼合成丙二酸單酰輔酶A的酶的開放閱讀框。

16、根據權利要求14所述的核苷酸，其中所述核苷酸包含SEQ?ID?NO：1的堿基序列、與之相應的RNA堿基序列、或隨其冗余的密碼子序列。