[發(fā)明專利]抗體文庫篩選的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200580034143.3
• 申請日: 2005-10-07
• 公開（公告）號: CN101052879A
• 公開（公告）日: 2007-10-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 馬里克·若澤·雅內(nèi)克·格特魯?shù)隆に顾_;赫勒爾德·雷厄瑟夫
• 申請（專利權(quán)）人: 奧菲技術(shù)科學(xué)院
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 北京邦信陽專利商標(biāo)代理有限公司
• 代理人: 黃澤雄;崔華

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及篩選分子文庫的方法，尤其是噬菌體展示文庫，以鑒 別或選擇其中一種或多種成員，所述成員是一種或多種靶體的候選結(jié) 合伴侶(partners)，尤其是細(xì)胞表面分子的候選的結(jié)合伴侶。本發(fā)明 進(jìn)一步涉及到從其它文庫成員中分離所述靶體的備選結(jié)合伴侶的經(jīng) 改進(jìn)的方法。

背景技術(shù)

噬菌體抗體展示技術(shù)被證明是一項(xiàng)非常適于抗體的篩選和選擇 以確定目標(biāo)抗原的技術(shù)(綜述見Hoogenboom等人，1998， Immunotechnol.，4：1-20)。大量的方案依賴于可以獲得純化和/或重組 的抗原，所述抗原在被固定至固體載體上之后被篩選。

探測細(xì)胞表面的分化和鑒別某些細(xì)胞類型或疾病相關(guān)的狀態(tài)特 有的細(xì)胞表面分子的結(jié)合伴侶是開發(fā)標(biāo)靶向治療的最有前途的方法。 然而，對這些結(jié)合伴侶的鑒別往往是挑戰(zhàn)性的實(shí)驗(yàn)。

鑒別細(xì)胞表面分子的結(jié)合伴侶的常規(guī)方法是基于將細(xì)胞在含有 復(fù)合的噬菌體展示單鏈Fv(scFv)文庫的懸浮液或培養(yǎng)基中孵育，隨 后進(jìn)行幾次清洗(通常5次或更多)以及對結(jié)合的噬菌體的酸或堿洗 脫(例子見Hoogenboom等人，1999，Eur.J.Biochem.，260：774-784； Ridgeway等人，1999，Cancer?Reserch，59：2718-2723；Wong等人.， 2001，Cancer?Immunol.Immunother.，50：93-101)。在這之前，通常通 過對不相關(guān)的細(xì)胞類型進(jìn)行陰性淘洗除去不相關(guān)的結(jié)合伴侶。最近更 加改進(jìn)的和更加高通量的方法是將所述細(xì)胞固定至硝化纖維素薄膜 之后，用噬菌體展示文庫篩選細(xì)胞(Radosevic等人，2003，J.Immunol. Methods，272：219-233)。

使用噬菌體展示文庫對細(xì)胞表面結(jié)合蛋白的篩選、選擇和分類的 常規(guī)方法的可選擇的和節(jié)省時間的方法已被Giordano等人闡述，且被 稱為BRASIL方法(Biopanning?and?Rapid?Analysis?of?Selective Interactive?Ligands，2001，Nature?Med.，11：1249-1253)。這個方法基 于對游離的和細(xì)胞結(jié)合的噬菌體的單步驟的有機(jī)相分離，相對于所述 常規(guī)方法的清洗步驟(即自由噬菌體從細(xì)胞中清洗除去的步驟)而言， 該方法的清洗步驟具有的本質(zhì)優(yōu)點(diǎn)是避免了密集勞動、效率低以及造 成細(xì)胞和潛在配體流失。

發(fā)明內(nèi)容

令人驚奇地，人們現(xiàn)在發(fā)現(xiàn)，與BRASIL方法教導(dǎo)的相反，篩選、 選擇和鑒別細(xì)胞表面分子結(jié)合伴侶的顯著改進(jìn)的方法涉及在有機(jī)相 分離之前，使所述細(xì)胞至少經(jīng)受一次清洗步驟。與如上所述的常規(guī)的 清洗和洗脫方法相比，所述方法還表現(xiàn)出顯著的進(jìn)步。

概括而言，本發(fā)明因而提供一種篩選分子文庫以鑒別或選擇其中 一種或多種成員的方法，所述成員是一種或多種靶體的候選的結(jié)合伴 侶，所述方法包括：

(a)用一種或多種靶體接觸表達(dá)文庫；

(b)使所述靶體經(jīng)受至少一次清洗的步驟；

(c)通過有機(jī)相的分離，從未結(jié)合的所述表達(dá)文庫成員中分離出 與表達(dá)文庫的一種或多種成員結(jié)合的所述靶體，從而從其他文庫成員 中分離出所述靶體的候選的結(jié)合伴侶。

可選擇地被認(rèn)為，本發(fā)明提供一種在表達(dá)文庫中從其他未結(jié)合的 文庫成員中分離出與靶體結(jié)合的候選結(jié)合伴侶的方法，該方法包括在 此限定的步驟(a)至(c)。