[發明專利]培養人胚胎干細胞

無效

• 申請號: 200580029937.0
• 申請日: 2005-09-08
• 公開（公告）號: CN101052712A
• 公開（公告）日: 2007-10-10
• 發明（設計）人: J·A·湯姆森;T·路德維格
• 申請（專利權）人: 威斯康星校友研究基金會
• 主分類號: C12N5/08
• 分類號: C12N5/08;C12N5/02
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司
• 代理人: 余穎

1.一種不使用飼養細胞或調理培養基啟動新的培養的人胚胎干細胞系的方法，所述方法包括以下步驟：

將來自胚泡的細胞平鋪在含有含量足以產生并維持新的增殖干細胞系處于未分化狀態的維生素、氨基酸、葡萄糖、成纖維細胞生長因子、γ氨基丁酸、2-哌啶酸、鋰和脂類的培養基中。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述培養基含有濃度至少為40ng/ml的成纖維細胞生長因子。

3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述培養基還含有運鐵蛋白和胰島素。

4.一種體外細胞培養物，包含處于培養容器中的：

人胚胎干細胞；

培養基，所述培養基含有鹽、維生素、氨基酸、葡萄糖、成纖維細胞生長因子、γ氨基丁酸、2-哌啶酸、鋰和脂類，它們的含量足以將所述干細胞歷經多次培養傳代而維持未分化狀態，所述培養基不含飼養細胞且從未接觸飼養細胞；和

從人膠原蛋白和選自纖連蛋白、玻連蛋白和層粘連蛋白中至少其二的至少兩種人蛋白質制造的人源化基質。

5.如權利要求4所述的方法，其特征在于，所述基質含有膠原蛋白、纖連蛋白、玻連蛋白和層粘連蛋白。

6.如權利要求4所述的方法，其特征在于，所述培養基含有濃度至少為40ng/ml的成纖維細胞生長因子。

7.如權利要求4所述的方法，其特征在于，所述培養基還含有運鐵蛋白和胰島素。

8.一種體外細胞培養物，包含處于培養容器中的：

人胚胎干細胞；

從人膠原蛋白和選自膠原蛋白、纖連蛋白、玻連蛋白和層粘連蛋白中至少其二的至少兩種人蛋白質制造的人源化基質；和

培養基，所述培養基含有維生素、氨基酸、葡萄糖、成纖維細胞生長因子和脂類，它們的含量足以將所述干細胞歷經多次培養傳代而維持未分化狀態，所述培養基不含飼養細胞且從未接觸飼養細胞。

9.一種培養新的人胚胎干細胞的方法，所述方法包括以下步驟：

(a)從處于胚泡狀態的胚胎分離內細胞團；

(b)在含有含量足以將所述干細胞歷經多次培養傳代而維持未分化狀態的維生素、氨基酸、葡萄糖、成纖維細胞生長因子、γ氨基丁酸、2-哌啶酸、鋰和脂類的培養基中培養步驟(a)的細胞；；

(c)所述培養步驟在人蛋白質基質上進行；和

(d)連續擴增在培養基上增殖的細胞。

10.如權利要求11所述的方法，其特征在于，所述培養基中的人蛋白質包括至少3種選自下組的蛋白質：膠原蛋白、纖連蛋白、玻連蛋白和層粘連蛋白。

11.一種包含生長在人蛋白質基質上的人胚胎干細胞的細胞培養物，所述干細胞來自從未接觸過動物細胞、動物蛋白、飼養細胞或調理培養基的譜系，所述細胞培養基能夠將所述細胞歷經20次以上傳代培養而維持其未分化狀態、多能性和正常核型。

12.一種包含人胚胎干細胞的細胞培養物，所述人胚胎干細胞不展示唾液酸Neu5Gc。