[其他]由原生質體再生稻株的方法

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• 申請號: 101986000003448
• 申請日: 1986-05-21
• 公開（公告）號: CN86103448B
• 公開（公告）日: 1988-06-29
• 發明（設計）人: 藤村達人;櫻井基;赤木宏守;根岸友子;広瀨晃
• 申請（專利權）人: 三井東壓化學株式會社
• 代理公司: 中國專利代理有限公司
• 代理人: 羅宏

1、一種形成水稻植株的方法，其特征在于包括下述步驟：

第一步是在MS、B5，N6或R2瓊脂培養基中培養水稻種子的胚、盾片或胚根，再由水稻種子的胚、盾片或胚根衍生出第一個愈傷組織，而其中每種培養基中含有（1）0.01-1%（重）的酵母抽提物，0.01-1%（重）的麥芽汁，0.01-1%（重）的酪蛋白水解物，或5-20%（重）的馬鈴薯抽提物，（2）0.1-10mg/l的2，4-D，以及（3）0-5mg/l的芐基腺嘌呤0-5mg/l的激動素，

第二步是將第一個愈傷組織在R2，N6或MS培養基中培養成易釋放出原生質體的細胞團，而其中每種培養基中含有（1）0.1-1%（重）的酵母抽提物，0.1-1%（重）的麥芽汁，0.1-1%（重）的酪蛋白水解物，或5-20%（重）的馬鈴薯抽提物，（2）0.1-10mg/l的2，4-D以及（3）0-5mg/l的芐基腺嘌呤或0-5mg/l的激動素，培養基中的細胞濃度為0.3-3%（重），

第三步是用釋放原生質體的酶溶液處理細胞團以釋放出原生質體，而所述的酶溶液含有0.1-10%（重）的纖維素酶，0.1-5%（重）的浸解酶，0-5%（重）的氯化鈣，0-5%（重）的葡聚糖硫酸酯的鉀鹽，以及3-15%（重）甘露糖醇，

第四步是在條件培養基中培養所述的原生質體，以培養出第二個愈傷組織，而所述的條件培養基是由第二步所用的培養基得到，并且放在含有滲壓劑的親水支持體層上，親水支持體層上條件培養基的厚度為200-300μm，

第五步是將所述的第二個愈傷組織在分化培養基中培養，以再生出水稻植株，而所述的培養基是MS培養基，它含有0.1-1%（重）的酵母抽提物，0.1-1%（重）的麥芽汁，0.1-1%（重）的酪蛋白水解物或5-20%（重）的馬鈴薯抽提物，（2）0-5mg/l的芐基腺嘌呤或0-5mg/l的激動素。

2、根據權利要求1所述的方法，其中以繼代培養方式培養胚、盾片或胚根。

3、根據權利要求1所述的方法，其中以繼代培養的方式培養第一個愈傷組織。

4、根據權利要求1所述的方法，其中條件培養基的滲透作用用蔗糖調節，pH不大于5.2。

5、根據權利要求1所述的方法，其中親水支持體采用瓊脂、藻酸或明膠。

6、根據權利要求1所述的方法，其中水稻是稻（Oryza sativa）。

7、根據權利要求1所述的方法，其中第五步驟還包括在第二個愈傷組織在分化培養基中培養之前，先將它放在MS、B5、N6或R2培養基中生長，上述各培養基含有（1）0.1-1%（重）的酵母抽提物，0.1-1%（重）的麥芽汁，0.1-1%（重）的酪蛋白水解物，或5-20%（重）的馬鈴薯抽提物，（2）0.1-10mg/l的2，4-D，以及（3）0-5mg/l的芐基腺嘌呤或0-5mg/l的激動素。