[發(fā)明專利]姬松茸的發(fā)酵工藝及其多糖肽的生產(chǎn)方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 02136516.4
• 申請日: 2002-08-16
• 公開（公告）號: CN1398978A
• 公開（公告）日: 2003-02-26
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 錢秀萍;藍德剛;王強
• 申請（專利權(quán)）人: 維京仲華（上海）生物醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號: C12P21/02
• 分類號: C12P21/02;C12N1/14
• 代理公司: 上海新天專利代理有限公司
• 代理人: 王巍

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬生物工程技術(shù)領(lǐng)域。具體涉及一種姬松茸的發(fā)酵工藝及其多糖肽的生產(chǎn)方法。

背景技術(shù)

姬松茸又稱巴西蘑菇、小松菇，是一種珍鋒稀食用真菌。其子實體內(nèi)含有多糖和甾醇類等多種活性成份以及各種微量元素、人體必需的多種氨基酸，對腫瘤、痔瘡、神經(jīng)痛具療效，還具有降血脂和降膽固醇的作用，是一種很有開發(fā)前途的藥用真菌。在美國、日本多項研究成果申報了專利。

姬松茸的主要活性成份是姬松茸多糖，多糖組份中以葡萄糖為主，以具有β-(1→6)側(cè)鏈的β-(1→3)葡聚糖為主要結(jié)構(gòu)。研究結(jié)果表明，姬松茸多糖主要通過激活機體免疫系統(tǒng)，增強巨噬細胞的吞噬作用，刺激干擾素的形成，激活機體內(nèi)自然殺傷細胞，促進免疫球蛋白、白細胞介素的生成，提高淋巴細胞的轉(zhuǎn)化率等而發(fā)揮其抗腫瘤作用，在基因水平上有較強的抗化學(xué)誘變作用，可用于慢性乙型肝炎及惡性腫瘤放化療后乏力，白細胞減少，免疫功能降低的綜合治療。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于改進生產(chǎn)工藝，提高菌絲體的得率和多糖肽的產(chǎn)量。

本發(fā)明提供了一種姬松茸的發(fā)酵工藝及其多糖肽的生產(chǎn)方法。該方法包括下列步驟：(1)姬松茸的育種與特征

用組織分離法獲得姬松茸純菌株AB103，將其接種在PDA或麥芽汁固定斜面培養(yǎng)基上，于25～28℃恒溫培養(yǎng)7～10天后，置于4℃左右的冰箱中保存?zhèn)溆谩２捎米贤庹T變法對菌絲細胞進行誘變，紫外照射距離為20～30cm，照射時間為5～15秒。初篩誘變株在固體培養(yǎng)基上的菌絲體生長能力，復(fù)篩誘變株在液體培養(yǎng)基中菌絲體生長量和多糖肽產(chǎn)量，獲得優(yōu)質(zhì)菌株AB103-51。該菌株分類命名為巴西蘑菇(姬松茸)Agaricus?blazei，該菌株已于2002年7月16日保存于中國微生物保藏管理委員會普通微生物中心，保藏中心的編號為CGMCCNo.07722001325B。并于2002年7月16日檢測結(jié)果為存活。

固體培養(yǎng)用40～50％的稻草(或木屑、棉子殼)、1％的蔗糖或葡萄糖、10～20的麩皮或米糠、1％的石膏或碳酸鈣，加水拌勻，含水量60％，PH自然，瓶裝，在1.5kg/m²的壓力下滅菌1小時，冷卻后，在無菌操作下?lián)u瓶種子接種于固體培養(yǎng)基內(nèi)，培養(yǎng)溫度22～26℃，20～30天菌絲體布滿全瓶。原基萌發(fā)后，降低栽培溫度22～25℃，保持適當(dāng)濕度、光照和通風(fēng)，30～40天后，子實體成熟；(2)菌株的發(fā)酵工藝流程

本發(fā)明采用通氣發(fā)酵法生產(chǎn)姬松茸菌絲體，發(fā)酵培養(yǎng)基成本低廉，發(fā)酵周期短。發(fā)酵工藝流程如下：

斜面菌種或茄瓶菌種→搖瓶種子→50-100L³種子罐(一級)→500-1000L³種子罐(二級)→5000-10噸發(fā)酵罐。

搖瓶種子的裝量75～150ml/250ml或150～150ml/250ml培養(yǎng)基，往復(fù)式搖床振蕩速度80～150次/分，或旋轉(zhuǎn)式搖床振蕩速度100～200轉(zhuǎn)/分，培養(yǎng)溫度24～28℃。培養(yǎng)時間2～3天。種子罐和發(fā)酵罐投料量50～70％，接種量8～10％，攪拌速度100～200rpm，通氣量1∶0.5～1∶1v/vmin，發(fā)酵培養(yǎng)時間4～7天。隨著發(fā)酵培養(yǎng)時間延長，培養(yǎng)基由混濁逐漸變清。發(fā)酵液中還原糖、氨態(tài)氮、PH都逐漸降低，菌絲體生物量不斷增加，至第5～6天時多糖肽產(chǎn)量達最高時終止發(fā)酵。(3)姬松茸多糖肽的提取

本發(fā)明所述姬松茸AB103-51的多糖肽提取工藝是：姬松茸發(fā)酵液用沙芯漏斗抽濾，分離發(fā)酵液和菌絲體，工廠可用板框機分離發(fā)酵液與菌絲體。將濕菌絲體加10～20倍水浸泡過夜，用90～100℃水浴回流提取2～5小時，過濾，將濾液濃縮后加2～5％倍的95％乙醇0～4℃沉淀8～10小時，干燥得姬松茸多糖肽。

本發(fā)明所述經(jīng)組織分離法得到的AB103菌種，子實體肉質(zhì)，多數(shù)單個，個別叢生。菌蓋半球形至平展，直徑3～10cm，淺褐色至棕褐色，菌蓋表面有纖維狀鱗片，邊緣有菌幕碎片。菌柄近圓柱形生于菌蓋中央，初期為實心，中后期疏松至空心。菌環(huán)易脫落。擔(dān)孢子淺紅色至棕褐色，光滑，短橢圓形。菌絲分枝，有橫隔，無鎖狀聯(lián)合。物理誘變所得的菌株AB103-51在固體木屑麩皮培養(yǎng)基上培養(yǎng)，其子實體形態(tài)與天然實體相同。