[發(fā)明專利]一種bFGF－PLGA緩釋微球及其制備方法和用途

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 02133476.5
• 申請(qǐng)日: 2002-07-15
• 公開（公告）號(hào): CN1398584A
• 公開（公告）日: 2003-02-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 裴福興;段宏;沈彬;陳堅(jiān);王光林;何勤
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 裴福興;段宏;沈彬
• 主分類號(hào): A61K9/16
• 分類號(hào): A61K9/16;A61K9/52;A61K38/18;A61P19/08
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技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(basic?fibroblast?growth?factor，bFGF)的緩釋微球。其制備方法為w/o/w復(fù)乳-干燥法，用高分子材料PLGA為載體材料包封bFGF，在機(jī)械攪拌作用下制備出該緩釋bFGF微球。

背景技術(shù)

堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(basic?fibroblast?growth?factor，bFGF)不僅是分裂素，而且是體內(nèi)已知的作用最強(qiáng)的促血管生長(zhǎng)因子。作為廣譜的分裂素，bFGF可促進(jìn)間質(zhì)細(xì)胞、前成骨細(xì)胞、成骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、雪旺細(xì)胞和成纖維細(xì)胞等多種細(xì)胞增殖和分化。已有研究表明外源性bFGF能夠促進(jìn)多種細(xì)胞分裂和趨化，誘導(dǎo)胚胎正常發(fā)育，促進(jìn)血管生長(zhǎng)、創(chuàng)面愈合和神經(jīng)再生及功能恢復(fù)。

由于bFGF在體內(nèi)的半衰期為3-5分鐘，全身應(yīng)用將被快速滅活難以發(fā)揮其有效作用，局部穿刺分次給藥也難以產(chǎn)生有效作用，并且增加患者的痛苦和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，所以不能滿足實(shí)驗(yàn)和臨床應(yīng)用的需要。因此，研究既能長(zhǎng)期緩釋bFGF又能保持其生物活性的緩釋制劑具有重要意義。其中，微球技術(shù)是研究較少的一種緩釋bFGF的方法。國(guó)外研究應(yīng)用溶劑擴(kuò)散法制成bFGF的EVAc緩釋微球后，其生物活性喪失99％，而海藻酸鹽緩釋微球雖能保持81％的bFGF的生物活性，但其緩釋期為2-12天。用于包封bFGF的載體材料可分為天然、半合成和合成的高分子材料。近年來，合成高分子材料因其生物相容性良好，可生物降解吸收，在體內(nèi)較穩(wěn)定，降解期可調(diào)控等優(yōu)點(diǎn)而受到廣泛重視，是一種理想的微球制備材料。Camarata應(yīng)用溶劑-非溶劑法制成PLGA的神經(jīng)生長(zhǎng)因子緩釋微球，其中丙交酯∶乙交酯＝70∶30，微球的降解期，體外為5周，體內(nèi)為4.5周。若將丙交酯與乙交酯的比例調(diào)節(jié)為85∶15，則微球的降解期在體內(nèi)可達(dá)三個(gè)月。Maysinger將30％的聚乳酸和70％聚羥基乙酸混合形成聚乳酸—聚羥基乙酸共聚物(Polylactic?acid-polyglycolic，acid，PLGA)后應(yīng)用乳液分散溶劑蒸發(fā)法制成纖毛神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的緩釋微球，在24天內(nèi)能緩釋有效的藥物濃度。但是經(jīng)查閱文獻(xiàn)，目前國(guó)內(nèi)尚無bFGF微球及其相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種以PLGA為基質(zhì)材料，表面光滑圓整，顆粒規(guī)則無粘連，粒徑在10μm下可控，載藥量和包封率高，緩釋期在2周以上，可用于關(guān)節(jié)間隙、骨折和骨缺損等局部給藥或靜脈給藥的緩釋微球及其制備方法。

本發(fā)明的技術(shù)方案為：應(yīng)用w/o/w復(fù)乳-干燥法，將基質(zhì)材料溶于有機(jī)溶劑中制成油相，取適量bFGF逐滴加入上述油相中，將其勻化后形成初乳；將此乳液滴加入水相分散介質(zhì)溶液中，充分勻化，室溫下磁力攪拌3-5小時(shí)，即得bFGF-PLGA-Ms膠體溶液；在bFGF-PLGA-Ms膠體溶液中加入適量的支架劑，常規(guī)凍干保存。

本發(fā)明微球基質(zhì)材料選用PLGA，其分子量為4.0×10³-5.5×10⁴，PLA∶PGA質(zhì)量百分比為10∶90-50∶50，并且其分子量為4.0×10³-5.5×10⁴。有機(jī)溶劑為二氯甲烷(DCM)或二氯甲烷(DCM)和丙酮(AC)的混合液，DCM和AC的體積百分比為75-100∶0-35。

本發(fā)明水相分散介質(zhì)PVA的水解度為87-90％，聚合鏈節(jié)數(shù)為1700-1750，重均分子量為1.0-2.0×10⁴，濃度為1-7％；或水相分散介質(zhì)為PVA-PEG混合水溶液，溶液濃度為4-10％，PVA與PEG的質(zhì)量百分比為40-70∶30-60?。

本發(fā)明采用普通電磁攪拌器，其攪拌速度為600-1200RPM，旋渦混合速度選擇中速為宜。制備微球的勻化方式包括旋渦混合和超聲，每次超聲5-10s左右，每次旋渦混合時(shí)間3-5min左右。

本發(fā)明制備微球內(nèi)水相體積可在50-300μl之間；外水相中無機(jī)鹽的濃度可在0-2.0g/100ml，也可適當(dāng)增加。凍干微球之前，加入支架劑包括葡萄糖、乳糖或甘露醇等，其含量為1-5％。

采用本發(fā)明方法所制備微球表面光滑圓整，顆粒規(guī)則無粘連(圖1，圖2)，粒徑在10μm下可控(圖3)，載藥量和包封率高，緩釋期在2周以上，其體外釋藥曲線較為光滑平坦(圖4)，可用于關(guān)節(jié)間隙、骨折和骨缺損等局部給藥或靜脈給藥。