[發(fā)明專利]厭氧菌感染的一種快速診斷的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 02115903.3
• 申請日: 2002-05-30
• 公開（公告）號: CN1386863A
• 公開（公告）日: 2002-12-25
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 薛存寬;王模榮;蔣鵬;王玲;袁彬
• 申請（專利權(quán)）人: 華中科技大學(xué)同濟醫(yī)學(xué)院附屬梨園醫(yī)院
• 主分類號: C12Q1/04
• 分類號: C12Q1/04;C12Q1/37
• 代理公司: 武漢開元專利代理有限責(zé)任公司
• 代理人: 朱盛華

技術(shù)領(lǐng)域??本發(fā)明涉及一種厭氧菌感染的診斷方法，具體地為用常規(guī)采樣，不經(jīng)培養(yǎng)，可直接快速診斷的方法。

背景技術(shù)??厭氧菌是一類只能在無氧或低氧分壓、低氧化還原電位(Eh)、含有一定CO₂環(huán)境中才能生長的細(xì)菌，它只能從無氧酵解中獲得能量。厭氧菌的種類十分復(fù)雜，有30多個屬、數(shù)百種，隨厭氧培養(yǎng)、分離、鑒定技術(shù)的快速發(fā)展，還在不斷發(fā)現(xiàn)新種。臨床上感染致病常見的厭氧菌有10個屬30多種。

厭氧菌作為正常菌群廣泛存在于人體皮膚深部和腔道深部黏膜表面。口、咽腔和腸道是人體內(nèi)最大的厭氧菌的“儲菌庫”，是由于各種原因引起的菌群失調(diào)、機體免疫功能下降或細(xì)菌易位導(dǎo)致感染，它是一種十分常見的條件致病菌。臨床標(biāo)本的厭氧菌分離率國外報告為51～78％，國內(nèi)為30～67％。所以，不做厭氧菌診斷幾乎將遺漏掉50％以上的病原菌。很多厭氧菌對臨床常用抗菌藥物(如磺胺類、氨基糖甙類、大環(huán)內(nèi)酯類、喹諾酮類和許多頭孢類藥物)不敏感。所以，不做厭氧菌診斷將導(dǎo)致病情延誤和藥物浪費。

目前厭氧菌感染的診斷方法包括有以下幾種——

1、細(xì)菌學(xué)診斷

是一經(jīng)典方法。它的診斷步驟應(yīng)包括三級——(1)臨床標(biāo)本原代厭氧培養(yǎng)+G⁺染色厭氧菌初步診斷；(2)分離厭氧培養(yǎng)+G⁺染色+某些生化實驗；(3)分離厭氧培養(yǎng)+特殊生化實驗和氣-液相色譜對其終末代謝產(chǎn)物進行分析。臨床檢測基本上停留于一級。為了保證診斷可靠性，下述每一個環(huán)節(jié)都應(yīng)充分保障：

(1)標(biāo)本的采集：凡可能被正常菌群污染的標(biāo)本，如咳痰、纖支鏡吸出的痰、一般纖支鏡細(xì)胞刷取的分泌物、支氣管-肺灌洗液、流出的膿、鼻-口-咽-肛-陰道-竇道拭子、中段尿或?qū)颉⑽?腸內(nèi)容物等，均無送檢價值，即90％以上的臨床常規(guī)采樣標(biāo)本不能用來進行厭氧菌的細(xì)菌學(xué)診斷。以臨床最為常見的下呼吸道厭氧菌感染為例，要求標(biāo)本采用肺穿刺、環(huán)甲膜穿刺、帶特殊保護套的纖支鏡細(xì)胞刷取的分泌物或氣管切開抽取物作標(biāo)本，這不僅對患者帶來痛苦、風(fēng)險，而且還需要一定的設(shè)施條件，故不可能廣泛普及開展。

(2)標(biāo)本保送：標(biāo)本采集后應(yīng)盡量不接觸空氣。因在空氣中暴露可能引起兼性厭氧菌過度生長或標(biāo)本干燥，而影響厭氧菌的生存，甚至造成死亡。通常采用方法為：或注射器抽取后針頭橡皮封堵，在20～30min內(nèi)送檢；或立即穿刺注入特制的密封的，預(yù)先充滿純N₂的無氧密封小瓶中，組織標(biāo)本置入特制的厭氧袋或罐在1～2h內(nèi)送檢；或床邊立即接種。這不僅需要特殊裝置，而且稍有不慎即將會出現(xiàn)假陰性，臨床上難以達到要求。

(3)厭氧培養(yǎng)：采用低氧化還原電位培養(yǎng)基(要求新鮮配制)和嚴(yán)格無氧環(huán)境(70％N₂+20％CO₂+10％H₂)。經(jīng)常采用的是“厭氧罐”、“生物(厭氧袋)袋”、“厭氧室或厭氧手套箱”，即需要特殊的裝置。原代培養(yǎng)至少2～3天，排除診斷則需2周。診斷周期長，易貽誤病的治療。

從上述可知，對于絕大多數(shù)厭氧菌感染的診斷無論從標(biāo)本采樣、標(biāo)本保送及厭氧培養(yǎng)都相當(dāng)不易，所以，國內(nèi)大多數(shù)醫(yī)院都沒有將其列為常規(guī)檢測。

2、免疫學(xué)檢查

熒光抗體染色法、酶聯(lián)免疫組化法等都已成功應(yīng)用于厭氧菌感染的診斷，其與細(xì)菌學(xué)診斷符合率很高。但它們專屬性高，不同的厭氧菌要求不同的診斷盒，厭氧菌的科、屬、種如此之多，給配制帶來一定難度，故臨床實用價值不大。

3、厭氧菌的分子生物學(xué)診斷

DNA探針、基因擴增(PCR)技術(shù)也用于厭氧菌診斷研究。與免疫學(xué)檢測原因相同，其臨床實用價值不大。

4、厭氧菌特殊代謝產(chǎn)物檢測