[發(fā)明專利]犢牛凝乳酶的制備方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 02115260.8
• 申請日: 2002-05-23
• 公開（公告）號: CN1379090A
• 公開（公告）日: 2002-11-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳燕娜
• 申請（專利權(quán)）人: 陳燕娜
• 主分類號: C12N9/48
• 分類號: C12N9/48;C07K1/36
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.犢牛凝乳酶的制備方法，其特征在于：將新鮮或冷凍的犢牛皺胃清洗后用奶粉和CaCl₂抹于表面，經(jīng)低溫條件下誘導(dǎo)后剔除膠原和脂肪，切碎，加入預(yù)冷4℃的提取液，提取液為含5％的NaCl和10％無水乙醇的水溶液，提取液的容積與物料濕重比為3-5∶1，勻漿，攪拌浸提30-240min，離心，取上清液，重復(fù)1-3次，合并幾次所得的上清液，于上清液中加入容積數(shù)為上清液5％的1mol/L的HCl沉淀雜蛋白，離心，取上清液，于上清液中加入重量數(shù)為上清液5％的NaCl溶解出酶蛋白，再用1mol/L?NaOH調(diào)整pH值為微酸性后，即為液體粗酶，將液體粗酶用DEAE離子交換柱層析，0.05mol/L-0.4mol/L、pH5.4-6.4檸檬酸—檸檬酸鈉緩沖液進(jìn)行pH線性梯度洗脫，洗脫至洗脫液在280nm波長下無吸收，洗脫液的流速為1.25ml/min，收集器收集洗脫液，每管裝5ml，取收集的第12-16管酶液，經(jīng)透析、聚乙二醇濃縮到原體積的1/3后，再用Sephadex層析柱層析，0.05mol/L-0.4mol/L、pH5.4-6.4檸檬酸—檸檬酸鈉緩沖液進(jìn)行pH線性梯度洗脫至洗脫液在280nm波長下無吸收，洗脫液的流速為5ml/min，收集器收集洗脫液，每管裝5ml，收集第19-26管即為純化的凝乳酶。