[發明專利]轉基因植物及其制品的檢測方法

無效

• 申請號: 02115231.4
• 申請日: 2002-05-17
• 公開（公告）號: CN1385541A
• 公開（公告）日: 2002-12-18
• 發明（設計）人: 葉長明;藍崇鈺;魏祥東;陳東紅;林周
• 申請（專利權）人: 中山大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

????????????????????????技術領域

本發明屬于轉基因植物安全管理技術領域和生物技術領域，具體涉及轉基因植物及其制品的快速檢測方法。

????????????????????????背景技術

1、轉基因植物的安全管理

轉基因植物(transgenic?plant)是指人為地通過一定方法將外源基因轉移到植物的基因組中，并遺傳、表達的植物變異體，被轉入植物基因組的外源基因稱為轉化基因(transgene)。

1983年人類首次報道轉基因煙草誕生，到2000全球轉基因植物種植面積達4420萬公頃。轉基因植物從誕生之日起，就有人擔心它們可能存在的生態和食品安全問題，這些擔心曾受到一些研究結果的支持。為了加強對轉基因生物的管理，避免其可能帶來的生態、食品威脅，保護消費者權益，保證轉基因植物研究正常發展，許多國際組織、國家和地區都制定了相應的法律、法規。這些法律、法規的實施，首先要求相關職能部門、研究機構在實施管理時，對有關植物及其產品進行檢測、鑒定。建立一套通用的，快速、準確、經濟、方便地檢測鑒定技術，是當前國內外的一個研究熱點。

2、轉基因植物檢測技術的發展和存在的問題

迄今，轉基因植物的檢測主要限于目的基因檢測，報告或標記基因檢測。目的基因即賦予植物有用性狀的功能基因，如抗病、抗蟲、抗除草劑基因等，目前在研的目的基因數以萬計，而且每天都在增加，涉及植物種類超過100種。截止2001年12月，僅美國FDA批準產業化的51種轉基因植物所含目的基因就超過65種；截止1999年12月，我國農業部共批準150多項轉基因植物進入商品化生產、環境釋放或中間試驗，涉及基因約103種。報告或標記基因是為了方便篩選和鑒別轉基因植物而采用的植物基因組沒有的外源基因，常用的報告或標記基因約20種，如nos、NPTII、GUS、GFP、bar基因等。在具體檢測方法上，又有四個層次：

(1)DNA的分子雜交(Southern雜交)、聚合酶鏈式反應(PCR)等分析技術，用以探測目標基因存在狀況，PCR技術因簡便易行而用得最多。但過去人們主要針對目的基因、報告或標記基因，其局限性是，如果一個具體植物不知道研究者導入何種基因，如果一種制品含有多種植物成分，用上述方法將帶有很大的盲目性，要花較長的時間才能確定它(們)是否轉基因植物或制品。

(2)RNA的分子雜交(Northern雜交)、反轉錄PCR(RT-PCR)等分析技術，用以探測目標基因在RNA水平的表達狀況，其缺陷與上述相同，而且檢測樣品必需是鮮活的植物材料，無法檢測干枯、死亡材料和以植物為原料各種制品。

(3)蛋白質的ELISA、Western?blot等分析技術，利用抗體-抗原之間的免疫反應來分析基因在蛋白質水平上的表達狀況，其不足是，如果一個具體植物不知道研究者導入何種基因，如果一種制品含有多種植物成分，將難以確定選用何種基因產物的抗體進行檢測。

(4)基因功能分析技術，一些轉化基因產物(酶或蛋白質)的功能可用轉基因植物的活體、活組織、蛋白粗提液與底物反應來觀察；而另一些基因編碼抗生素抗性、除草劑抗性等，則可以通過簡單的種子萌發等活體試驗加以分析。不難看出，它們都必須用活體或活組織，且在結果的判斷上容易出現誤差。

國內外均未見利用T-DNA左右邊界序列、CaMV?35S?polyA、nos啟動子、nos終止序列設計合成引物進行PCR檢測轉基因植物及其制品的報道。雖有幾篇利用CaMV?35S啟動子檢測轉植物及其制品的報道，但對于易感染CaMV的十字花科植物，單獨使用CaMV?35S啟動子檢測有可能造成重要誤差。

???????????????????發明內容

本發明的目的是提供一種轉基因植物及其制品的檢測方法。該方法根據轉基因植物最普遍的特征序列：T-DNA左右邊界序列、CaMV?35S?polyA、nos啟動子、nos終止序列設計合成引物，進行PCR檢測轉基因植物及其制品，從而克服上述現有檢測方法所存在的問題。