[發明專利]轉基因植物及其制品的檢測方法

無效

• 申請號: 02115231.4
• 申請日: 2002-05-17
• 公開（公告）號: CN1385541A
• 公開（公告）日: 2002-12-18
• 發明（設計）人: 葉長明;藍崇鈺;魏祥東;陳東紅;林周
• 申請（專利權）人: 中山大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1、一種轉基因植物及其制品的檢測方法，其特征是：采用常規方法提取被測樣品的DNA，根據T-DNA左右邊界序列、CaMV?35S啟動子、CaMV?35S?polyA、nos啟動子和nos終止序列設計合成一對或多對引物，進行PCR，得到相應的DNA擴增產物或擴增產物的信號。

2、按照權利要求1所述的方法，其特征是具體包括以下步驟：

(1)合成2條以上引物，其中一條為T-DNA左右邊界序列引物，長度18-25nt，其它為CaMV?35S啟動子、CaMV?35S?polyA、nos啟動子和nos終止序列中任意一段或多段序列，長度≥18nt；

(2)取T-DNA左右邊界序列引物，與一條或多條其它引物配成一對或多對PCR引物，按常規方法對樣品DNA進行PCR擴增反應，以pBI121或pCAMBIA1300質粒DNA作正對照，以未轉基因植物或制品的DNA作負對照；PCR反應條件是94℃預變性5分鐘，反應25-35循環，每循環包括：94℃變性1分鐘，45-65℃退火1分鐘，72℃延伸反應30秒-10分鐘，循環結束后，追加72℃延伸反應5分鐘；

(3)PCR擴增產物通過瓊脂糖凝膠電泳和溴化乙啶染色，紫外燈下觀察到大小50-10000bp的DNA擴增片段。

3、按照權利要求2所述的方法，其特征是進行實時定量PCR：在步驟(2)的PCR反應管中加入與雙鏈DNA特異結合的SYBR熒光染料，或者特異的TaqMan熒光探針；PCR擴增產物通過熒光掃描儀觀測到相應熒光信號，或者按步驟(3)觀察結果。

4、按照權利要求2所述的方法，其特征是進行PCR-ELISA：在步驟(1)中，用生物素標記合成的引物；PCR擴增產物與固定在微板上的鏈親和素-蛋白A結合，再分別與特異性地高辛探針、酶標地高辛抗體進行ELISA反應，用酶標儀讀取405-410nm的吸光值，或者按步驟(3)觀察結果。