[發(fā)明專利]生物發(fā)酵提純苦馬豆素工藝

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 02114591.1
• 申請(qǐng)日: 2002-05-24
• 公開（公告）號(hào): CN1396263A
• 公開（公告）日: 2003-02-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 童德文;曹光榮;趙寶玉;葛鵬斌
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 楊凌大農(nóng)生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): C12P17/06
• 分類號(hào): C12P17/06;//;C12R1645)
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責(zé)任公司
• 代理人: 李鄭建

1.一種生物發(fā)酵提純苦馬豆素工藝，其特征在于，通過(guò)豆類絲核菌7-3生物發(fā)酵，使提取所用的原材料中苦馬豆素得以富集，再采用陽(yáng)離子交換柱層析、硅膠柱層析，分段升華等獲得苦馬豆素。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生物發(fā)酵提純苦馬豆素工藝，其特征在于，具體工藝如下：

1)豆類絲核菌7-3保存：自行分離的豆類絲核菌7-3?PDA培養(yǎng)基接種，4℃冰箱保存，每20天～30天傳代一次；

PDA培養(yǎng)基的配方組成為：去皮馬鈴薯200g～2000g，瓊脂15g～150g，葡萄糖20g～200g，水1000ml～10000ml；

2)豆類絲核菌7-3接種、培養(yǎng)與菌絲體收集：在無(wú)菌狀態(tài)下，將7-3菌種接種于生物發(fā)酵用Czapek’s培養(yǎng)基，25℃～27℃通氣培養(yǎng)2周，收集菌絲體，干燥，備用；

Czapek’s培養(yǎng)基的配方組成為：蔗糖30g～300g，硝酸鈉3g～30g，磷酸氫二鉀1.3g～13g，硫酸鎂0.5g～5g，氯化鉀0.5g～5g，硫酸亞鐵0.01g～0.1g，酵母浸膏3g～30g，水1000ml～10000ml。

3)豆類絲核菌中苦馬豆素的提純，按下列工藝進(jìn)行：

第一步，將豆類絲核菌菌絲體100g～1000g置入80％～95％乙醇溶液1000mL～5000mL，提取乙醇提取液并分離殘留物；

第二步，H₂O∶CH₂CL₂100mL～1000mL萃取CH₂CL₂液，回收CH₂CL₂，將水提取液調(diào)pH10.0再用H₂O∶CH₂CL₂100mL～1000mL萃取，分離二氯甲烷層；

第四步，將水層揮發(fā)至干，得到總生物堿5g～50g；

第五步，將得到總生物堿進(jìn)行減壓梯度升華，最后得到苦馬豆素純品1.5mg～15mg。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的生物發(fā)酵提純苦馬豆素工藝，其特征在于，具體工藝如下：

1)豆類絲核菌7-3保存：自行分離的豆類絲核菌7-3?PDA培養(yǎng)基接種，4℃冰箱保存，每20天～30天傳代一次；

PDA培養(yǎng)基的配方組成為：去皮馬鈴薯200g，瓊脂15g，葡萄糖20g，水1000ml；

2)豆類絲核菌7-3接種、培養(yǎng)與菌絲體收集：在無(wú)菌狀態(tài)下，將7-3菌種接種于生物發(fā)酵用Czapek’s培養(yǎng)基，25℃通氣培養(yǎng)2周，收集菌絲體，干燥，備用；

Czapek’s培養(yǎng)基的配方組成為：蔗糖30g，硝酸鈉3g，磷酸氫二鉀1.3g，硫酸鎂0.5g，氯化鉀0.5g，硫酸亞鐵0.01g，酵母浸膏3g，水1000ml；

3)豆類絲核菌中苦馬豆素的提純，按下列工藝進(jìn)行：

第一步，將豆類絲核菌菌絲體100g置入95％乙醇溶液1000mL，提取乙醇提取液并分離殘留物；

第二步，H₂O∶CH₂CL₂100mL萃取CH₂CL₂液，回收CH₂CL₂，將水提取液調(diào)pH10.0再用H₂O∶CH₂CL₂100mL萃取，分離二氯甲烷層；

第四步，將水層揮發(fā)至干，得到總生物堿5g；

第五步，將得到總生物堿進(jìn)行減壓梯度升華，最后得到苦馬豆素純品1.5mg。