[發明專利]抗乙肝病毒表面抗原S的人源化抗體及其制備方法

無效

• 申請號: 01802990.6
• 申請日: 2001-10-04
• 公開（公告）號: CN1395617A
• 公開（公告）日: 2003-02-05
• 發明（設計）人: 洪孝貞;金根洙
• 申請（專利權）人: 韓國生命工學研究院
• 主分類號: C12N15/13
• 分類號: C12N15/13
• 代理公司: 中科專利商標代理有限責任公司
• 代理人: 李悅

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本發明涉及抗乙肝病毒表面抗原S的人源化抗體及其制備方法。具體地說，它涉及這樣一種人源化抗體，它包括在其可變區的HCDR1，HCDR2，HCDR3和LCDR1，LCDR2，LCDR3上具有來源于人抗體的氨基酸序列的重鏈和輕鏈，通過從上述人源化抗體的重鏈刪除結合MHC?II類分子的肽序列而使人抗-小鼠抗體(HAMA)的應答最小化，它還涉及含有上述人源化抗體的各個重鏈和輕鏈基因的表達載體，通過用重鏈和輕鏈表達載體轉染的能夠產生人源化抗體的轉化體，以及通過培養上述轉化體大規模生產人源化抗體的方法。

????????????????????????發明背景

乙肝病毒(HBV)侵入人體，導致慢性和急性肝炎。如果情況更糟的話，它可能是一種導致肝硬化和肝癌的病原。據估計全世界高達三億患者感染HBV(Tiollais和Buendia，Sci.Am.，264，48，1991)。HBV的包膜由三種蛋白質組成。具體地說，它由包括S抗原的主要蛋白質、包括S抗原和前S2抗原的中間蛋白質、以及包括S抗原、前S2抗原和前S1抗原的大蛋白質組成(Neurath，A.R.和Kent，S.B.H.，Adv.Vir.Res.，34：65-142，1988)。上述所有的HBV表面抗原蛋白質均能夠誘導中和HBV的抗體。其中，S抗原占總包膜蛋白的約80％，并且具有通常在所有HBV亞型中都存在的稱之為“共有a”的中和表位。

當HBV感染時，例如，HBV陽性母親生產的新生兒或接觸HBV的醫學研究所的職員或接受HBV相關肝病患者的肝移植的接受者情況下，已用HB免疫球蛋白(HBIG)預防HBV感染(Beasley等，Lancet，2，1099，1983；Todo等，Hepatol.，13，619，1991)。然而，目前使用的HBIG由人血漿制備，因此存在抗抗原的特異性低和污染的可能性相對較高的缺點。而且，必須連續提供人血。

為了克服這些缺點，已經研制出應用抗HBV表面抗原的小鼠單克隆抗體的方法。通常，小鼠單克隆抗體具有對抗原高度親和和能夠大規模生產的優點，但是，它也具有這樣的缺點，即當施用到人體中時會在人體中產生人抗小鼠抗體的應答(在下文中，稱之為“HAMA應答”)(Shawler等，J.Immunol.，135，1530，1985)。

為了克服這些缺點，已經研制出人源化抗體，其中小鼠單克隆抗體的高親和性和特異性被維持，而HAMA應答被降至最低。通過基因工程方法將小鼠單克隆抗體的互補決定簇(下文稱之為“CDRs”)移植到人抗體的構架區構建人源化抗體。已經報道這種人源化抗體在人體中表現小得多的免疫原性(Riechmann等，Nature，332，323，1988；Nakatani等，Protein?Engineering，7，435，1994)。然而，據報道，這種方法產生的人源化抗體也有缺點，即當反復給人體施用時，則抗體中來源于小鼠的CDRs能夠引起免疫應答(Stephens等，Immunology，85，668-674，1995；Sharkey等，CancerResearch，55，5935s-5945s，1995)。因此，期望當人源化抗體中來源于小鼠抗體的CDRs的氨基酸殘基被取代為人抗體的殘基時，HAMA應答將被降低。

在抗體分子的可變區中有3個重鏈CDR環-HCDR1，HCDR2和HCDR3-和3個輕鏈CDR環-LCDR1，LCDR2和LCDR3。為了用本領域上述方法生產人源化抗體，移植了全部6個CDR環。然而，因為CDR中并不是所有殘基都直接結合抗原(Padlan等，FASEB?J.，9，133，1995)，所以通過將直接涉及抗原結合的小鼠單克隆抗體的特異性決定殘基(下文稱之為“SDRs”)移植到人抗體的構架區而構建的人源化抗體將產生比已知的人源化抗體更低的HAMA應答。