[發明專利]含有攜帶剪接受體的基因工程細胞非編碼序列的高效逆轉錄病毒載體

有效

• 申請號: 01802669.9
• 申請日: 2001-09-08
• 公開（公告）號: CN1388829A
• 公開（公告）日: 2003-01-01
• 發明（設計）人: 金善榮;柳承信;李準臺
• 申請（專利權）人: 百療醫株式會社
• 主分類號: C12N15/63
• 分類號: C12N15/63
• 代理公司: 中科專利商標代理有限責任公司
• 代理人: 李悅

1.一種來源于鼠白血病病毒(MLV)載體的逆轉錄病毒載體，包括

1)插入多克隆位點上游的，作為來源于外源基因的非編碼序列的延伸因子EF1α的非編碼序列的一部分，和

2)一種導入到EF1α的非編碼序列中的剪接受體下游的突變，所述逆轉錄病毒載體沒有病毒編碼序列。

2.權利要求1的逆轉錄病毒載體，其中EF1α的非編碼序列是剛好就在翻譯起始密碼子之前的人EF1α的內含子和外顯子2的序列。

3.權利要求2的逆轉錄病毒載體，其中EF1α的非編碼序列具有SEQ?IDNO.1的核苷酸序列。

4.權利要求1的逆轉錄病毒載體，其中的突變導入到該剪接受體下游的SEQ?ID?NO.1的第205位和第206位的GT(鳥嘌呤-胸腺嘧啶)位點。

5.權利要求4的逆轉錄病毒載體，其中GT堿基對用CC(胞嘧啶-胞嘧啶)堿基對取代。

6.權利要求1的逆轉錄病毒載體，它包括：

1)來源于起始的MLV載體的核苷酸序列，其是5’LTR，包含在起始的gag基因的上游的剪接供體的最小包裝序列，多嘌呤示蹤，和3’LTR；

2)多克隆位點；

3)EF1α的核苷酸序列的一部分，從內含子3’末端開始到剛好就在外顯子2的翻譯起始密碼子之前，其被插入到該最小包裝序列和該多克隆位點之間；和

4)在該多克隆位點下游的一種SV40最小啟動子或一種內部核糖體進入位點(IRES)。

7.權利要求1至6之一的逆轉錄病毒載體，其中該起始的MLV載體的5’LTR中的U3或其部分被作為外源啟動子的HCMV?IE(人巨細胞病毒立即早期)啟動子所取代。

8.權利要求6的逆轉錄病毒載體，它進一步包括NEO或MDR基因作為可篩選的標記基因。

9.權利要求1的逆轉錄病毒載體，它是載體MT5，包括

1)來源于起始MLV載體的核苷酸序列，其為5’LTR，含有起始的gag基因的上游的剪接供體的最小包裝序列，多嘌呤示蹤，和3’LTR；

2)多克隆位點；

3)一部分的EF1α核苷酸序列，它從內含子的3’末端開始到剛好就在外顯子2的翻譯起始密碼子之前，被插入到該最小包裝序列和該多克隆位點之間；

4)在多克隆位點下游的一種內部核糖體進入位點(IRES)；和

5)在該剪接受體下游，取代在+977～+978位點上的GT堿基對的CC堿基對。

10.用權利要求9的載體MT5轉化的大腸桿菌菌株MT5(JM)(保藏號KCCM-10205)。

11.權利要求8的逆轉錄病毒載體，它是載體MTM5，包括

1)來源于起始的MLV載體的核苷酸序列，其為5’LTR，含有起始的gag基因的上游的剪接供體的最小包裝序列，多嘌呤示蹤、和3’LTR；

2)多克隆位點；

3)一部分的EF1α核苷酸序列，它從內含子的3’末端開始到剛好就在外顯子2的翻譯起始密碼子之前，被插入到該最小包裝序列和該多克隆位點之間；

4)在該多克隆位點下游的一種內部核糖體進入位點(IRES)；和

5)在剪接受體下游，在+977～+978位點上的取代該GT堿基對的CC堿基對；和

6)作為可篩選的標記基因的MDR基因。