[發明專利]乙型肝炎病毒基因分型和基因變異診斷芯片

無效

• 申請號: 01116078.0
• 申請日: 2001-05-15
• 公開（公告）號: CN1339608A
• 公開（公告）日: 2002-03-13
• 發明（設計）人: 陳瑞陽;高英堂;陳力;宋文芹
• 申請（專利權）人: 天津南開基因工程有限公司;南開大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 天津市學苑有限責任專利代理事務所
• 代理人: 趙尊生

1、一種乙型肝炎病毒基因分型和基因變異診斷芯片，其特征在于在基質尼龍膜上設置探針，探針在膜上的步陣，乙肝病毒特異性探針100-1003個，包括P區：從2357核苷酸開始至1621個核苷酸位置終止，與核苷酸類似物和抗病毒藥物的耐藥相關探針117-381個；S變異區：S1：2848-3172，S2：3173-155，S：156-833個核苷酸，與免疫逃亡，臨床漏檢有關的探針52-137個；C變異區：從1814-1901-2450個核苷酸，與干擾素應答，免疫逃避，臨床狀況有關的探針177-380個；X變異區：1374-1818個核苷酸之間，與病毒復制和原發性肝癌相關的缺失突變探針37-115個；探針的大小8-25個堿基；探針的3’末端加尾巴10個以上。

2、按照權利要求1所說的乙型肝炎病毒基因分型和基因變異診斷芯片，其特征在于所說的探針在膜上的步陣：1，2，14，15，16，17，29，30，218，219，233，234，421，422，436，437，434，435，449，450號為質控探針；3-36號為乙型肝炎基因分型探針；37-54號為血清分型探針；55-171號為核苷酸類似物和抗病毒藥物的耐藥相關探針；172-224號為免疫逃亡探針；225-404號為臨床漏檢，干擾素應答，免疫逃避，臨床狀況有關的探針；405-448號為病毒復制和原發性肝癌相關的缺失突變特異性探針。

3、權利要求1所說的乙型肝炎病毒基因分型和基因變異診斷芯片的制備方法，其特征在于它包括下述步驟：

(1)設計乙肝病毒特異性探針，包括P區、S區、C區、X區；

(2)使用DNA合成儀合成探針；

(3)在3’末端加尾巴進行探針處理，使它能夠固化在尼龍膜上；

(4)使用帶有正點荷的尼龍膜，用芯片點樣機上按預先設定好的順序進行點樣；

(5)將點好的膜放在長波紫外燈(365nm)下進行交聯5-10分鐘，使DNA牢固固定在膜上。

4、權利要求1所說的乙型肝炎病毒基因分型和基因變異診斷芯片的使用方法，其特征在于它包括下述步驟：

(1)將待檢血清加入Lysis?Buffer處理血清，然后100℃煮沸10分鐘，離心備用；

(2)PCR擴增：采用套式PCR方法，第一次PCR反應：

在PCR反應管中加入PCRmix、處理好的標本和引物1，按下列程序進行PCR擴增：94℃?1min，1個循環

第二次擴增：在PCR反應管中加入PCR?mix、處理好的標本和引物2，按下列程序進行擴增：

(3)采用硅膠樹脂的方法進行所需DNA片段的回收探針；

(4)隨機引物標記探針；

(5)在雜交箱中進行雜交：預雜交為0.5小時-1小時，雜交為3-12小時；

(6)顯色；

(7)將作好的芯片掃描輸入計算機檢測，輸出結果。