[發明專利]檢測外周血抗原特異性細胞毒性T淋巴細胞的方法及試劑盒

無效

• 申請號: 01115916.2
• 申請日: 2001-05-22
• 公開（公告）號: CN1387046A
• 公開（公告）日: 2002-12-25
• 發明（設計）人: 王恒
• 申請（專利權）人: 中國醫學科學院基礎醫學研究所
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/576;G01N33/574
• 代理公司: 永新專利商標代理有限公司
• 代理人: 林曉紅

1、一種檢測外周血抗原特異性細胞毒性T淋巴細胞的方法，所述方法包括如下步驟：

a)構建和制備MHC?I類分子的突變體蛋白，以使之能與苯甲酮類光交聯劑結合而同時不改變其空間構象及與TCR結合的功能；

b)將突變體蛋白與抗原特異性肽保溫形成復合物；

c)將所述復合物與苯甲酮類光交聯劑在4℃避光保溫過夜；

d)將步驟c)的復合物與可能含有抗原特異性細胞毒性T淋巴細胞的外周血淋巴細胞樣品4℃保溫30分鐘；

e)以大于310nm波長的紫外光照射步驟d)的混合物30分鐘；以及

f)免疫熒光檢測步驟e)的混合物以確定外周血淋巴細胞樣品中抗原特異性細胞毒性T淋巴細胞的存在。

2、權利要求1的方法，其中所述的MHC?I類分子的重鏈為HLA-A2分子，其突變體為HLA-A2第58位氨基酸突變為半胱氨酸。

3、權利要求1的方法，其中所述的苯甲酮類光交聯劑選自苯甲酮-4-馬來酰亞胺，4，4′-二馬來酰亞氨基苯甲酮，4-(2-碘乙酰氨基)苯甲酮，苯甲酮-4-異硫氰酸酯。

4、權利要求3的方法，其中所述的苯甲酮類光交聯劑為苯甲酮-4-馬來酰亞胺。

5、權利要求1的方法，其中免疫熒光檢測為流式細胞檢測法。

6、權利要求1的方法，其用于檢測病毒、細菌或寄生蟲感染性疾病、腫瘤或同種異體移植排斥反應中產生的細胞毒性T淋巴細胞反應。

7、權利要求1的方法，其用于評價疫苗。

8、權利要求1的方法，其用于檢測外周血中乙型肝炎病毒抗原特異性細胞毒性T淋巴細胞。

9、權利要求8的方法，其中所用抗原特異性肽為肽HBc_18-27(FLPSDFFPS)和肽HBs_335-343(WLSLLVPFV)。

10、一種用于體外檢測外周血抗原特異性細胞毒性T淋巴細胞的試劑盒，該試劑盒包括苯甲酮類光交聯劑，MHC?I類分子突變體蛋白及抗原特異性肽，以及進行檢測所必需的其它輔助試劑。

11、權利要求10的試劑盒，其中所述的苯甲酮類光交聯劑選自苯甲酮-4-馬來酰亞胺，4，4′-二馬來酰亞氨基苯甲酮，4-(2-碘乙酰氨基)苯甲酮，苯甲酮-4-異硫氰酸酯。

12、權利要求11的試劑盒，其中所述的苯甲酮類光交聯劑為苯甲酮-4-馬來酰亞胺。

13、權利要求10的試劑盒，其用于檢測病毒、細菌或寄生蟲感染性疾病、腫瘤或同種異體移植排斥反應中產生的細胞毒性T淋巴細胞反應。

14、權利要求10的試劑盒，其用于評價疫苗。

15、權利要求10的試劑盒，其用于檢測外周血中乙型肝炎病毒抗原特異性細胞毒性T淋巴細胞。

16、權利要求15的試劑盒，其中所含的抗原特異性肽為肽HBc_18-27(FLPSDFFPS)和肽HBs_335-343(WLSLLVPFV)。