[發明專利]鼻咽癌惡性轉化基因Tx基因DNA序列及其測定方法

無效

• 申請號: 01114446.7
• 申請日: 2001-04-30
• 公開（公告）號: CN1367246A
• 公開（公告）日: 2002-09-04
• 發明（設計）人: 曹亞;廖偉;黎明;任維;夏林慶;翁新憲;鄧錫云
• 申請（專利權）人: 中南大學湘雅醫學院
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;A61P35/00
• 代理公司: 湖南兆弘專利事務所
• 代理人: 趙洪,謝新元

1?鼻咽癌惡性轉化基因Tx基因gDNA序列全長13kb，與人免疫球蛋白kappa輕鏈基因高度同源，其特征在于：

1)Tx基因含有Igκ的J1-J5五個J區，一個C區，但缺乏

??Igκ的C區，除此之外，Tx還有重組信號序列

??(recombination?signal?sequence，RSS)、N-segment、核基

??質相關區(matrix?associated?region，MAR)等序列，與

??正常的Igκ基因的JC區gDNA比較，Tx基因在某些位

??點存在缺失或點突變，Tx基因是一缺乏V區的異常的

??人免疫球蛋白kappa輕鏈基因。

2)用分子克隆的方法可以直接克隆出Tx基因的cDNA序

??列。

2?按照權利要求1所述的Tx基因，其特征在于克隆人鼻咽癌惡性轉化基因Tx基因的方法是：將人鼻咽癌細胞系CNE2作為克隆Tx基因的來源，提取該細胞系的gDNA，打斷成9-22kb的片段，重組到載體λDash中，轉染JB6細胞株，挑取在軟瓊脂上形成的陽性克隆，提取該陽性克隆的gDNA，將其再次打斷，重組到λDash載體中，轉染JB6細胞系，挑取在軟瓊脂上形成的陽性克隆，經過這樣的三次篩選，最后得到一個長約13kb的Tx基因。

3?按照權利要求1、2所得到的Tx基因gDNA經過測序，確定Tx基因全序列是：???????1?gtgtggaggg?aaaggtgtga?acccgggagg?cggagcttgc?agtgagccaa?gatcgcacca??61?ctgcactcca?gcctgggcga?cagagcgaga?ctccgtctca?aaaaaaataa?ataaataaaa?121?taaaaaataa?ttaggtactc?taggcccagt?gacctgtctc?tgtactctgt?aaattcaggt?181?cacctgctca?gggctaatct?gagagaaggt?ctctcttcag?ttgaattttg?aaagacaatt?241?agcagttcac?aagctaaccc?aggtggacaa?agatgttccc?aagcagaggg?agtgcttgtg?301?aaagctggag?gccatagaaa?aactctaagg?agtgtaggga?ggtgggagta?atgtatggaa?361?ggggtggaga?tggaaggtta?agagagatac?aaggctgcaa?aaatggagct?ggactcaaaa?421?gaaaatactg?aaaaggtctt?cagtgttgtt?gatgagatta?ctatggaaac?actatggaac?481?actgggactc?catggcagct?ccaaagatgg?catgcgcctg?gtccagctca?gtaagagctg?541?agctcttcct?gtgctgtgaa?aacagacaaa?ccaaccaagt?aaagtctact?tttctactct?601?attagtcttc?actttggttt?cgtataccat?ctggagctac?atttcaaaat?gcatttcaaa?661?gttatgagcc?ttaagttgat?atatatttag?tctacctttt?tttaaataac?attgcagcaa?721?aggagaagat?aaaatagtaa?gacaacctgt?aattattact?cattgagaag?ctgatgattt?781?ccataattac?actaaatgaa?gtttatcctt?tgcaaaagcc?cccccagccc?accccaaaag?841?aaagtacaaa?aaaactggcc?atttttttta?attgcttgtt?tttctttgta?attaacattc?901?agtctacttt?ctaaaaaata?aataaataat?aagcagtcca?gatgtggcaa?gttgctaaag?961?aaaggaacca?tcaggccata?gacgtaaata?tattctcttc?ttggatttta?ggtctcacct1021?aagaaaataa?acacatgcta?tgtcagagaa?gcctcagggt?ttccacacct?gctcgaaaag1081?ggagttgagc?ttcagcagct?gacccaggac?tctgttcccc?tttggtgaga?agggtttttg1141?ttcagcaaga?caatggagag?ctctcactgt?ggtggacgtt?cggccaaggg?accaaggtgg1201?aaatcaaacg?tgagtagaat?ttaaactttg?cttcctcagt?tgtctgtgtc?ttctgttccc1261?tgtgtctatg?aagtgatcta?taaggtgact?ctgcaatcag?cctctgatat?ccttcaggga1321?aaagataaag?ataagtctgt?agtcaaactc?gagaattgat?tgcacatttt?ctttgaagag1381?caagcaagat?tcagtcattg?ggtgagaata?acttgtctaa?gtaatagctt?cagaaatgtc1441?ctggggaaca?taacatgttc?tggacagagc?cttggtcaat?tgtcagaaag?ggagtttttg1501?tataggaggg?aagttaagag?gaaccatgtg?tgtacacttt?tggccagggg?accaagctgg1561?agatcaaacg?taagtacttt?tttccactga?ttcttcactg?ttgctaatta?gtttactttg1621?tgttcctttg?tgtggatttt?cattagtcgg?atgccaggga?tctaacaaac?ttcattccca1681?ggttaggtac?agaggagggg?aaattgttcc?acaggacgct?agcttgtggc?taatttttaa1741?gatttctaaa?tcaaaataac?ttcattgggg?gaaagaggct?tgctgagctt?tcagggaggt1801?ttttgtaaag?ggaaaagtta?agacgaatca?ctgtgattca?ctttcggccc?tgggaccaaa1861?gtggatatca?aacgtaagta?catctgtctc?aattattcgt?gagattttag?tgccattgta1921?tcatttgtgc?aagttttgtg?atattttggt?tgaataaacc?tggtgaccca?gaagtaaata1981?gcaggacacc?agaaaatgaa?cttaaaaagc?tgagcaaata?gacgaatcat?tgggtttgag2041?aggagaatag?gattcatggg?ggaaatgggg?aagaaatagc?tagatttttc?tctgaacaag2101?cagcctatct?catatgattg?gcttcaagag?aggtttttgt?tgaggggaaa?gggtgagatc2161?cctcactgtg?gctcactttc?ggcggaggga?ccaaggtgga?gatcaaacgt?aagtgcactt2221?tcctaatgct?ttttcttata?aggttttaaa?tttggagcgt?ttttgtgttt?gagatattag2281?ctcaggtcaa?ttccaaagag?taccagattc?tttcaaaaag?tcagatgagt?aagggataga2341?aaattagttc?atcttaagga?acagccaagc?gctagccagt?taagtgaggc?atctcaattg2401?caagattttc?tctgcatcgg?tcaggttagt?gatattaaca?gcgaaaagag?atttttgtta2461?aggggaaagt?aattaagtta?acactgtgga?tcaccttcgg?ccaagggaca?cgactggaga2521?ttaaacgtaa?gtaatttttc?actattgtct?tctgaaattt?gggtctgatg?gccagtattg2581?acttttagag?gcttaaatag?gagtttggta?aagattggta?aatgagggca?tttaagattt2641?gccatgggtt?gcaaaagtta?aactcagctt?caaaaatgga?tttggagaaa?aaaagattaa2701?attgctctaa?actgaatgac?acaaagtaaa?aaaaaaaagt?gtaactaaaa?aggaaccctt2761?gtatttctaa?ggagcaaaag?taaatttatt?tttgttcact?cttgccaaat?attgtattgg2821?ttgttgctga?ttatgcatga?tacagaaaag?tggaaaaata?cattttttag?tctttctccc2881?ttttgtttga?taaattattt?tgtcagacaa?caataaaaat?caatagcacg?ccctaagaaa2941?aatcagggaa?aagtgaagtg?tacctatttg?ctatgtagaa?gaggcagctt?acttgaaaat3001?cagcagcaat?gttgttttta?gagtctgtaa?taagtaataa?actcaaaaag?acacattcta3061?taggaataag?ggcttcacag?atagagctca?ttttttaaaa?atccaatttg?tacattagac3121?taaacgtgaa?attatctctt?attgtaatgg?tggaaaggtg?gttattccca?aaagctcaat3181?ttcaaagaaa?tgtgtttaaa?tgaaaaaaag?taaataattg?cattttttaa?tgaccgtggg3241?tctgtgaaaa?aaataggaaa?tattttaaag?agtatgttct?ttcattatcc?tctgttatta3301?cttgtctaca?tttttattct?gccaagaagg?ccgtggcacc?gcgagctgta?gacagagccg3361?cggtctttct?cgattgagtg?gctttggtgg?ccatgccacc?gcgctcttgg?ggcagccgcc3421?ttgccgctag?tggccgtggc?caccctgtgt?ctgcccgatt?gatgctgccg?tagccagctt3481?tcctgatgca?cagtgataca?aataatgcca?ctaagggaaa?gagaacagaa?acgtaatggg3541?cgctgagctg?ggaaaaccag?ggagaagact?gatttattag?agatttcaga?aataaaattc3601?acattcatta?tgatatctca?ttagtgaaaa?tttccattag?gggattgtaa?ataatttaaa3661?gctttttttt?ttcagtgcta?tttaattatt?tcaatatcct?ctcatcaaat?gtatttaaat3721?aacaaaagct?caaccaaaaa?gaaagaaata?tgtaattctt?ttcagagtaa?aaatcacacc3781?catgacctgg?ccactgaggg?cttgatcaat?tcactttgaa?tttggcatta?aataccatta3841?aggtatatta?actgatttta?aaataagata?tattcgtgac?catgttttta?actttcaaaa3901?atgtagctgc?cagtgtgtga?ttttatttca?gttgtacaaa?atatctaaac?ctatagcaat3961?gtgattaata?aaaacttaaa?catattttcc?agtaccttaa?ttctgtgata?ggaaaatttt4021?aatctgagta?ttttaatttc?ataatctcta?aaatagttta?atgatttgtc?attgtgttgc4081?tgtcgtttac?cccagctgat?ctcaaaagtg?atatttaagg?agattatttt?ggtctgcaac4141?aacttgatag?gactatttta?gggccttttt?aaagctctat?taaaactaac?ttacaacgat4201?tcaaaactgt?tttaaactat?ttcaaaatga?ttttagagcc?ttttgaaa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