[發明專利]高效表達干擾素的腫瘤細胞內特異性增殖的腺病毒及其構建方法

無效

• 申請號: 01113007.5
• 申請日: 2001-05-25
• 公開（公告）號: CN1388248A
• 公開（公告）日: 2003-01-01
• 發明（設計）人: 錢其軍;車小燕;岑信棠;吳孟超
• 申請（專利權）人: 錢其軍
• 主分類號: C12N15/861
• 分類號: C12N15/861;C12N15/20;C12N15/31;A61P35/00
• 代理公司: 上海正旦專利代理有限公司
• 代理人: 姚靜芳

本發明涉及生命科學領域，具體涉及一種能高效表達干擾素的腫瘤細胞內特異性增殖的腺病毒，及其構建和增殖的方法。

惡性腫瘤嚴重危及人類的生命健康。目前對惡性腫瘤的常規治療仍為手術及放、化療，這種常規治療對極大多數腫瘤的療效仍不十分理想，對于極大多數化療藥物而言，其治療指數仍較低，即其治療劑量與毒性劑量較為接近。故這種治療方案通常伴有明顯的毒性作用，包括危及生命的骨髓抑制等。因此，研究選擇性殺滅腫瘤細胞而不影響正常細胞的方法對腫瘤治療非常重要，這種選擇性殺滅腫瘤細胞的方法主要依賴于腫瘤細胞的特異性標記，其療效也決定于該腫瘤標記是否嚴格限制于腫瘤細胞內。

干擾素可分為I及II型兩類干擾素。

I型干擾素包括干擾素-α及干擾素-β。干擾素-α主要由單核吞噬細胞產生，此外，B淋巴細胞和成纖維細胞也能合成干擾素-α；干擾素-β則主要由成纖維細胞產生。人干擾素-α和干擾素-β基因連鎖位于9號染色體。干擾素-α家族的基因至少有20個，約1-2kb長，無內含子，可編碼約20個結構相關的、分子量約18-26kDa不等的多肽，含189-195個氨基酸殘基，包括23個氨基酸的信號肽。干擾素-β基因只有一個，約777bp，無內含子，編碼187個氨基酸殘基組成的蛋白，包括21個氨基酸的信號肽。I型干擾素可抑制部分腫瘤細胞增殖，促進組織相容性復合體(MHC)-I類分子表達，增強細胞毒T細胞的殺傷效應，增強自然殺傷細胞(NK細胞)及巨噬細胞殺傷活性。抑制腫瘤新生血管生成。

II型干擾素即干擾素-γ。主要由活化的T細胞(包括T_H0、T_H1細胞)和NK細胞。人干擾素-γ基因位于12號染色體，6kb長，含4個外顯子和3個內含子，編碼166個氨基酸組成的蛋白，包括23個氨基酸的信號肽。干擾素-γ干擾素促進組織相容性復合體(MHC)-I類及MHC-II分子表達，激活單核/巨噬細胞系統，促進靜止的CD4+T細胞分化為T_H1細胞，并抑制T_H2細胞的增殖，增強細胞毒T細胞的成熟及殺傷活性，增強自然殺傷細胞(NK細胞)，抑制腫瘤新生血管生成。

腫瘤特異性增殖的病毒的根據腫瘤細胞與正常細胞某些生物學特性的差異，經過改造的病毒只能特異性地在腫瘤細胞內增殖、裂解腫瘤細胞，然后釋放出病毒顆粒，再次感染其它腫瘤細胞，再次增殖、裂解，如此產生放大效應，由于病毒能夠彌散到全身各個組織及臟器，因而能感染所有腫瘤細胞，從而殺滅局部及轉移的腫瘤，而不影響正常細胞。

但迄今為止，尚未見到應用腫瘤特異性增殖的病毒系統高效表達干擾素的報告。

本發明的目的在于提供一類能高效表達干擾素的腫瘤細胞內特異性增殖的腺病毒及其構建方法。

本發明的目的在于提供一類能高效表達干擾素的腫瘤細胞內特異性增殖的腺病毒的復合物。

本發明的目的在于研究上述能高效表達干擾素的腫瘤細胞內特異性增殖的腺病毒的應用。

本發明提供一類能高效表達干擾素的腫瘤細胞內特異性增殖的腺病毒，將編碼干擾素的核苷酸序列插入腫瘤細胞內特異性增殖的腺病毒基因組中的非增殖必需區域，該腺病毒選擇性地在腫瘤細胞內增殖，而在正常細胞內基本不增殖，通過腺病毒在腫瘤細胞內復制增殖，導致編碼干擾素的核苷酸序列拷貝數增加，從而干擾素基因表達量增加，該腫瘤細胞內特異性增殖的病毒可以是以下任何一種：(1)腺病毒增殖必需基因的轉錄起始點與編碼起始位點之間插入腫瘤細胞特異性激活的順式作用元件；(2)腺病毒可以是下述任何一種蛋白功能缺失：腺病毒E1B?55Kda蛋白功能缺失，腺病毒E1B?19Kda蛋白功能缺失，腺病毒E1A蛋白功能缺失。

上述重組病毒可以是腺病毒中任何一種型，編碼干擾素的核苷酸序列可以是編碼干擾素-α的核苷酸序列等。