[發明專利]高效表達干擾素的腫瘤細胞內特異性增殖的腺病毒及其構建方法

無效

• 申請號: 01113007.5
• 申請日: 2001-05-25
• 公開（公告）號: CN1388248A
• 公開（公告）日: 2003-01-01
• 發明（設計）人: 錢其軍;車小燕;岑信棠;吳孟超
• 申請（專利權）人: 錢其軍
• 主分類號: C12N15/861
• 分類號: C12N15/861;C12N15/20;C12N15/31;A61P35/00
• 代理公司: 上海正旦專利代理有限公司
• 代理人: 姚靜芳

1.一種能高效表達干擾素的腫瘤細胞內特異性增殖的腺病毒，其特征在于將編碼干擾素的核苷酸序列插入腫瘤細胞內特異性增殖的病毒基因組中的非增殖必需區域，該病毒選擇性地在腫瘤細胞內增殖，而在正常細胞內基本不增殖，通過病毒在腫瘤細胞內復制增殖，導致編碼干擾素的核苷酸序列拷貝數增加，從而干擾素基因表達量增加，該腫瘤細胞內特異性增殖的腺病毒可以是以下任何一種：

(1)腺病毒增殖必需基因的轉錄起始點與編碼起始位點之間插

入腫瘤細胞特異性激活的順式作用元件；

(2)腺病毒可以是下述任何一種蛋白功能缺失：腺病毒E1B

55Kda蛋白功能缺失，腺病毒E1B?19Kda蛋白功能缺失，腺

病毒E1A蛋白功能缺失

2.根據權利要求1所述能高效表達干擾素的腫瘤細胞內特異性增殖的腺病毒的構建方法，其特征在于：

(1)將編碼干擾素的核苷酸序列直接插入腫瘤細胞內特異性增

殖的腺病毒基因組中的非增殖必需區域；

(2)腺病毒增殖必需基因的轉錄起始點與編碼起始位點之間插

入腫瘤細胞特異性激活的順式作用元件；順式作用元件可

以是下述任何一種：(a).甲胎蛋白增強子及啟動子；(b).癌

胚抗原增強子及啟動子；(c).酪氨酸酶增強子及啟動

子；(d).ErbB2增強子及啟動子；(e).ErbB3增強子及啟動子；

(f).ErbB4增強子及啟動子；(g).DF3乳腺癌相關抗原增強

子；(h).前列腺素特異性抗原增強子及啟動子；(i).腺血管

舒緩素增強子及啟動子；(j).EB病毒中的Orip；(k).EB病

毒Orip中的FR增強子；(1).EB病毒BamHI?C-啟動子；(m).EB

病毒中的Orip聯合EB病毒BamHI?C-啟動子；(n).EB病毒

Orip中的FR聯合單純皰疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶基本啟動

子或SV40基本啟動子；???(3)腺病毒的蛋白功能缺失可以是下述任何一種：腺病毒E1B

55Kda蛋白功能缺失，腺病毒E1B?19Kda蛋白功能缺失，腺

病毒E1A蛋白功能缺失。

3.根據權利要求1所述的能高效表達干擾素的腫瘤細胞內特異性增殖的腺病毒，其特征在于它由要腺病毒增殖必需基因的轉錄起始點與編碼起始位點之間區域插入某種腫瘤細胞特異性激活的順式作用元件構成，該種順式作用元件可以是下述任何一種：甲胎蛋白增強子及啟動子，癌胚抗原增強子及啟動子，酪氨酸酶增強子及啟動子，ErbB2增強子及啟動子，ErbB3增強子及啟動子，ErbB4增強子及啟動子，DF3乳腺癌相關抗原增強子，前列腺素特異性抗原增強子及啟動子，腺血管舒緩素增強子及啟動子，EB病毒中的Orip，EB病毒Orip中的FR增強子，EB病毒BamHI?C-啟動子，EB病毒中的Orip聯合EB病毒BamHI?C-啟動子，EB病毒Orip中的FR聯合單純皰疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶基本啟動子或SV40基本啟動子，在EB病毒感染或潛伏感染細胞中特異性激活的順式作用元件，腺病毒增殖必需基因為腺病毒早期基因。

4.根據權利要求3所述的能高效表達干擾素的腫瘤細胞內特異性增殖的腺病毒，其特征在于所述腺病毒增殖必需基因至少含有以下一個腺病毒的早期表達基因：E1A、E1B、E2、E4。

5.根據權利要求1所述的能高效表達干擾素的腫瘤細胞內特異性增殖的腺病毒，其特征在于所述腺病毒E1B55Kda通過基因點突變、缺失突變及插入突變導致E1B?55Kda蛋白功能缺失。

6.根據權利要求1所述的能高效表達干擾素的腫瘤細胞內特異性增殖的腺病毒，其特征在于所述腺病毒E1B19Kda通過基因點突變、缺失突變及插入突變導致E1B?19Kda蛋白功能缺失。

7.根據權利要求1所述的能高效表達干擾素的腫瘤細胞內特異性增殖的腺病毒，其特征在于所述腺病毒E1A通過基因點突變、缺失突變及插入突變導致E1A蛋白功能缺失。

8.根據權利要求1所述的能高效表達干擾素的腫瘤細胞內特異性增殖的腺病毒，其特征在于所述編碼干擾素的核苷酸序列為編碼干擾素-α的核苷酸序列。