[發(fā)明專利]柯薩奇病毒B分型免疫球蛋白抗體G酶免盒及制備方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 01112708.2
• 申請日: 2001-04-24
• 公開（公告）號: CN1382990A
• 公開（公告）日: 2002-12-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 杜鳳鳴
• 申請（專利權(quán)）人: 杜鳳鳴
• 主分類號: G01N33/531
• 分類號: G01N33/531
• 代理公司: 上海新天專利代理有限公司
• 代理人: 王巍

本發(fā)明涉及生物技術(shù)產(chǎn)品，具體涉及一種柯薩奇病毒(Cox)B1-6分型抗體IgG試劑盒及制備方法。

柯薩奇病毒B1-6對易感人群具有高度的傳染性，兒童是最敏感的人群，病毒流行期兒童的感染率通常為10-20％家庭中所有敏感成員通常都被感染，因此，柯薩奇病毒B感染所致的相關(guān)疾病發(fā)病率較高，尤其柯薩奇病毒性心肌炎對兒童具有很大威脅的危害。臨床的病原學較早期診斷對有效治療有很重要意義。以往柯薩奇病毒B感染和致病的病原學確診法是病毒分離和心肌熒光染色，但這兩種方法的標本采集和處理較復雜，病毒分離和取心肌熒光染色程序煩瑣，實驗時間很長，因此病毒分離技術(shù)和取心肌熒光法的早期診斷優(yōu)勢不大。而從血清中檢測柯薩奇病毒B1-6型分型抗體IgG是病毒較早期感染的主要標志，確定CoxB1-6型型別感染是最后的病原學診斷。

本發(fā)明的目的在于克服以往方法的不足之處，研制一種靈敏度和特異性高的診斷試劑盒。

本發(fā)明提供了一種CoxB1-6分型抗體IgG?ELISA試劑盒，該試劑盒用CoxB病毒B1-6分型抗原包被，兔抗人IgG聯(lián)接辣根過氧化物酶為檢測抗體，檢測血清中的CoxB病毒B1-6分型抗體IgG，并且試劑盒由下列組成：預(yù)包被反應(yīng)條???96孔??????????酶結(jié)合物工作液???1瓶(10ml)樣品稀釋液?????1瓶(6ml)??????陽性對照?????????1支(200μl)陰性對照???????1支(200μl)???20倍濃洗滌液?????1瓶(13ml)顯色劑A????????1瓶(3ml)??????顯色劑B??????????1瓶(3ml)終止液?????????1瓶(3ml)

本發(fā)明的另一目的是提供了上述柯薩奇病毒B1-6分型抗體IgGELISA試劑盒的制備方法，該方法包括下列步驟：一、原材料及其規(guī)格

CoxB病毒B1-6分型IgG抗原的包被。酶標板：華東理工大學ELISA測定CV(％)＜10％陽性對照：診斷心肌炎患者血清，用本試劑盒測定A值＞0.8，放置-20

??????℃?zhèn)溆谩ｊ幮詫φ眨哼x正常人血清，用本試劑盒測定A值＜0.09，放置-20℃?zhèn)?/p>

??????用。酶標抗體：兔抗人IgG-HRP，(辣根過氧化物酶，RZ＞3.0?Sigma進口)酶標記兔抗人IgG，雙擴散1∶64。小牛血清：杭州四季清廠生產(chǎn)。其它試劑：

Na₂CO₃?????????????????A.R

NaHCO₃??????????????????A.R

小牛血清?????????????????杭州四季清廠生產(chǎn)

Na₂HPO₄·12H₂O???????A.R

NaH₂PO₄·2H₂O????????A.R

NaCL?????????????????????A.R

Tweel-20?????????????????化學純

甘油?????????????????????化學純

H₂O₂???????????????????A.R

檸檬酸.H₂O??????????????A.R

TMB??????????????????????熔點：168℃

EDTA?????????????????????A.R

H₂SO₄?????????????????A.R

Tris?????????????????????A.R蒸餾水必需符合《中國藥典》(1990)之規(guī)定細胞及動物要求：(1)Hela細胞(ATCC???CCL-2)(2)新西蘭大白兔????2公斤左右二、包被抗體(CoxB病毒1-6分型抗原)的制備。(一)CoxB病毒1-6型的制備(1)CoxB病毒1-6型毒種來源：昆明生物所(2)Hela細胞來源：中科院細胞所(3)細胞傳代：①培養(yǎng)劑配制：

PRMI1640基礎(chǔ)培養(yǎng)過濾除菌，200ml基礎(chǔ)培養(yǎng)劑中含：牛血清10％

青霉素4萬單位

鏈霉素4萬單位

6％NaHCO3?4ml

3％谷氨酰胺?6ml②胰酶(DT)配制：

用無Ca、Mg離子溶液配制0.3％胰酶消化液，用分散、消化細胞。③細胞傳代：