[發明專利]從一種印度蚯蚓體腔液中得到的引起精子不能游動的蛋白

無效

• 申請號: 01112435.0
• 申請日: 2001-03-30
• 公開（公告）號: CN1377889A
• 公開（公告）日: 2002-11-06
• 發明（設計）人: 穆華·慕克吉;沙姆帕·比斯瓦斯;馬拉比卡·達塔;薩米爾·巴塔查里亞;蘭簡·巴德拉;阿洛科·帕爾
• 申請（專利權）人: 科學和工業研究委員會
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C07K1/14;A61K35/64;A61K38/17;A61P15/16;C12Q1/04
• 代理公司: 北京三友知識產權代理有限公司
• 代理人: 穆魁良

1.一種新的從蚯蚓Pheretima?posthuma中分離到的精子不能游動蛋白，該蛋白具有如下性質：

a.陰離子蛋白，

b.分子量20kDa，

c.無毒且無溶血活性，而且

d.在2分鐘之內引起精子不能游動。

2.權利要求1的蛋白，其中當以10-15mg/Kg的劑量施用于大鼠和小鼠一個月時，沒有任何不良效果。

3.權利要求1的蛋白，該蛋白能夠內用或外用于包括人的哺乳動物。

4.一個新的精子不能游動因子，該因子也可以用作抗致育因子，它包含從屬于節肢動物門的蚯蚓Pheretima?posthuma中分離到的體腔液抽提物。

5.權利要求4的新的精子不能游動因子，還保護傳統的藥學上可接受的添加劑。

6.權利要求5的新的精子不能游動因子，它具有凝膠，粉末，膠囊，溶液，藥片和乳膏的形式。

7.權利要求4的新的精子不能游動因子，它無毒，當注射入哺乳動物后不表現出溶血活性。

8.權利要求4或5的新的精子不能游動因子，在兩分鐘之內，它顯示出100％精子不能游動的作用。

9.權利要求4的新的精子不能游動因子，它是非固醇類的并且可以外用。

10.一種用一般方法從蚯蚓Pheretima?posthuma的成熟標本的從體腔液分離活性因子的方法，其中所述方法包括如下步驟：

a.提供從蚯蚓Pheretima?posthuma的成熟標本得到的體腔液(CF)，將CF超聲處理后離心，

b.得到上清作為CF的粗抽提物，

c.將CF的粗抽提物進行凝集過濾層析，

d.在280nm處測定蛋白，

e.得到三個蛋白峰并分析每個峰的活性

f.收集活性峰III，凍干，透析，用DEAE柱進行HPLC以進一步純化，

g.洗脫不受束縛和受束縛的蛋白，

h.研究每個蛋白峰在280nm的吸收，

i.匯集，凍干，透析每個峰，檢測它們對精子游動性的活性，并且

j.鑒定出具有引起精子不能游動的第一個受束縛的峰，進行DS-PAGE電泳以檢測其純度及分子量。

11.權利要求10的方法，其中以10-15mg/Kg的劑量，通過將所述體腔液注射入大鼠和小鼠進行毒性檢測，注射一個月后沒有表現出致死效應。

12.權利要求10的方法，其中用大鼠的紅細胞進行溶血實驗，將10μl粗提取物加入制備的250μl紅細胞中，培育30分鐘后紅細胞仍然保持完整，表明該蛋白沒有任何溶血活性。

13.一種從雄性大鼠和小鼠制備精子懸浮液，用于生物分析的方法，所述方法包括下列步驟：

a.收集有生育能力的雄性大鼠和小鼠的精子，用BWW培養基稀釋，用油覆蓋、37℃、在CO₂恒溫箱、空氣中有5％的CO₂，平衡培養基，

b.再次培育精子懸浮液，使精子懸浮起來，

c.收集有高運動活力的精子懸浮液，其具有至少70％向前游動力。

d.精子懸浮液離心5-10分鐘，稀釋球狀精子，得到40-50μl具有所需濃度(2.0×10⁵-2.5×10⁵個精子)的溶液。

14.一種能夠內用或外用于哺乳動物的抗生育混合物，該混合物從屬于節肢動物門的蚯蚓Pheretima?posthuma中得到。