[發(fā)明專利]一種用于來自葉外植體的茶樹植物的微體繁殖的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 01109920.8
• 申請日: 2001-03-23
• 公開（公告）號: CN1376381A
• 公開（公告）日: 2002-10-30
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 因德拉·桑達爾;阿米塔·巴塔查里亞;馬杜·夏爾馬;P·S·阿胡賈
• 申請（專利權(quán)）人: 科學(xué)與工業(yè)研究委員會
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 隆天國際專利商標代理有限公司
• 代理人: 楊淑媛,鄭霞

本發(fā)明涉及一種采用從葉子中切割的外植體、用于茶樹植物(茶(Camelia?Sinensis))微體繁殖的有效方法。

茶是一種受歡迎的具有抗癌特性的含咖啡因飲料(Jankun等，為什么飲茶可以預(yù)防癌癥，《自然》5：561；1997)。雖然山茶屬有許多種，但僅C.sinensis(L.)O.Kuntze或茶和其不同栽培品種在商業(yè)上是很重要的(Braua?D.N.編輯，《茶葉栽培中的科學(xué)和實踐》，加爾各答茶研究協(xié)會；53-68；1989)。

茶葉栽培不僅是重要的職業(yè)提供源，而且也是世界所有茶葉生長地區(qū)掙取外匯的主要途徑(Wilson，R.C.編輯的《咖啡、可可和茶》中的Wilson，K.C.“植物學(xué)和植物改良”，CABI出版，Wallingford，UK：167-173；1999)。但是，茶葉的總產(chǎn)量不足以滿足本國和世界市場的需要(Kabra，G.D.《1999年茶時期的茶葉統(tǒng)計資料》，VolVIII，No.3?9-11，99，30-31；1999)。由于不同的生命性的(真菌、害蟲和病毒)和非生命的(冰凍、冰雹、寒冷、干旱、營養(yǎng)不良等)應(yīng)力(Wilson，R.C.編輯的《咖啡、可可和茶》中的Wilson，K.C.“植物學(xué)和植物改良”，CABI出版，Wallingford，UK：167-173；1999)使茶葉的產(chǎn)率和質(zhì)量進一步降低。

實際屬于木本樹種的茶樹具有伴隨著高度自身不相容性和近親繁殖衰退的長的生活周期(Braua?D.N.編輯，《茶葉栽培中的科學(xué)和實踐》中的Braua?D.N.“茶樹貿(mào)易”，加爾各答茶研究協(xié)會；53-68；1989)，這通常限制了通過常規(guī)的培育方法生產(chǎn)高產(chǎn)率且優(yōu)等和抗應(yīng)力茶樹。因此，生物技術(shù)方法的應(yīng)用是一種有效且供選擇的方法。但是，一種有效率且能繁殖的再生方法對于任何生物技術(shù)應(yīng)用是最重要的預(yù)先必需。

茶葉中的最嚴重問題是水皰枯萎病，因為它侵害用于制茶的葉子和幼芽，結(jié)果產(chǎn)率下降了50％。因此，抑制水皰枯萎病對于彌補這些損失是非常急需的。已確定了一些具有高產(chǎn)率和高質(zhì)量但易患水皰枯萎病的克隆，因此需要通過諸如葉外植體的同源組織的生物技術(shù)改良，因為諸如子葉外植體的異質(zhì)組織會導(dǎo)致基因分離和所需的高產(chǎn)率和高質(zhì)量的特性的喪失。因此，現(xiàn)存的方法在于諸如子葉外植體的異質(zhì)組織不具有上述有關(guān)用途，急需研制采用同源組織的微體繁殖的方法。葉外植體的再生是最佳優(yōu)選，因為：

(i)葉外植體是同源的；

(ii)葉子含有極大量復(fù)制數(shù)的葉綠體DNA，因此如果基因操作過程如轉(zhuǎn)基因或體細胞雜交的研制中使用葉子，則葉子表達可以擴增數(shù)倍；

(iii)葉子為任何基因操作技術(shù)提供了大量表面；

(iv)葉子是市售的成品茶的主要商業(yè)來源；

(v)葉子提供了豐富的原料供應(yīng)；

(vi)采用葉子作為外植體不會防礙植物一般的優(yōu)良特性和生長。

倘若在再生過程中沒有出現(xiàn)體細胞克隆變異，那么通過體細胞雜交或通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)的生物技術(shù)作物改良通常需要經(jīng)愈傷組織相的再生。由于茶樹壽命長，與快速生長的草本植物相比，愈傷組織相中的染色體變異的可能性要低。因此，已經(jīng)研究了用于使用經(jīng)愈傷組織相的葉外植體的茶樹植物的微體繁殖的有效的間接方法。

因此如果使用葉外植體或如果植物為50年或更長的非常老的樹，木本植物的再生能力很差。

為了產(chǎn)生經(jīng)體細胞胚胎發(fā)生的植物或經(jīng)愈傷組織相的未定形幼芽形成，但兩者之中任一的轉(zhuǎn)化頻率低(4-6％)或生根很少，已將葉外植體用于山茶屬的其它觀賞植物種中，例如C.japonica和C.reticulata(Sanjose和Vieitez，A.M.成熟山茶屬(Camellia)reticulata的體外葉子的未定形幼芽再生，《園藝科學(xué)雜志》67：677-683；1992；Sanjose，M.C.和Vieitz，A.M.“通過胚胎發(fā)生和柄發(fā)生來源于葉外植體培養(yǎng)物的山茶屬小植株的再生”，《園藝科學(xué)》，54：303-315；1993；Pedroso，M.C.和Pais，M.S.C.japonica?L.“葉中的直接胚胎形成”，《植物細胞再配(Rep.)》12：639-643；1993)。而且，這些均是觀賞植物種。但是，沒有關(guān)于通過C.sinensis即商用的山茶屬或茶樹中的愈傷組織、來自未定形幼芽形成的葉外植體的植物再生的方法的報道。