[發明專利]一種用于來自葉外植體的茶樹植物的微體繁殖的方法

無效

• 申請號: 01109920.8
• 申請日: 2001-03-23
• 公開（公告）號: CN1376381A
• 公開（公告）日: 2002-10-30
• 發明（設計）人: 因德拉·桑達爾;阿米塔·巴塔查里亞;馬杜·夏爾馬;P·S·阿胡賈
• 申請（專利權）人: 科學與工業研究委員會
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 隆天國際專利商標代理有限公司
• 代理人: 楊淑媛,鄭霞

1.一種用于茶樹植物的微體繁殖的方法，所述的方法包括下列步驟：

(a)切除來自體外培養的茶樹植物的完全合攏的、半開放的或全張開的葉的外植體；

(b)在溫度為20℃-40℃、在至少52μg/molm^-2s^-1的白色冷光存在且光照16小時光周期下，在第一培養基中培養用于愈傷組織誘導的外植體6-10周，所述的培養基為補充有維生素、1-3mg/l甘氨酸、2.5-10.0mg/l?2，4-二氯苯氧乙酸的0.8％瓊脂固化的基本Murashige和Skoog培養基；

(c)將所述愈傷組織轉移至用于生根的第二培養基中至少6-10周，所述的培養基為補充有細胞激動素如0.5-8mg/l?6-芐基氨基嘌呤和茁長素如0.1-0.8mg/l吲哚-3-丁酸或吲哚-3-乙酸的0.8％瓊脂固化的基本MS培養基；

(d)將所述生根愈傷組織轉移至用于引發幼芽的第三培養基中4-10周，所述的培養基為茁長素游離培養基且含0.5-8mg/l?6-芐基氨基嘌呤；

(e)將所述幼芽轉移至第四繁殖培養基中培養4-6周，得到生根的幼芽，所述的培養基為補充有5μM苯基噻二唑基脲的液體瓊脂化基本MS培養基；

(f)切斷長幼芽得到3cm長的末端，用吲哚-3-丁酸對其進行20-30分鐘的處理，并在含1∶1比例的沙和土的混合物的廣口瓶中培養幼芽60-75天；和

(g)在田地中使生根的幼芽生長以得到有活力且健壯的茶樹植物。

2.如權利要求1所述的方法，其中所述外植體是選自諸如Chinary、Assamica和Cambod的茶樹栽培品種。

3.如權利要求1所述的方法，其中所述外植體是從與頂芽極緊密附著的完全合攏的、半開放的或全張開的葉中切除的。

4.如權利要求1所述的方法，其中通過誘導葉外植體中的分生組織的活性，葉外植體通過愈傷組織形成而用于間接幼芽再生。

5.如權利要求1所述的方法，其中通過誘導葉外植體中的分生組織的活性、來源于在體內或體外條件下生長的選擇性植物的任一茶樹栽培品種的葉外植體可通過愈傷組織形成而用于間接幼芽再生。

6.如權利要求1所述的方法，其中所述外植體是從葉表面的任何部分切除的。

7.如權利要求1所述的方法，其中所述外植體是從幼芽尖端的第二和第三葉切除的。

8.如權利要求1所述的方法，其中所述葉外植體是在含0.1％多菌靈和0.05％鏈霉素的溶液中清洗，在吐溫20中洗滌，并在含一滴液體清潔劑的0.01％(w/v)氯化汞溶液中進行表面滅菌，然后在無菌蒸餾水中徹底洗滌。

9.如權利要求1所述的方法，其中第一培養基包括補充有諸如維生素B₁-HCl(0.05-2.0mg/l)、維生素B₆-HCl(0.25-1.5mg/ml)的維生素和煙酸(0.25-1.5mg/l)與甘氨酸(1.0-3.0mg/l)以及2.5-10mg/l優選5.0mg/l的2，4-二氯苯氧乙酸的標準的基本Murashige和Skoog培養基。

10.如權利要求1所述的方法，其中所述外植體必須置于上述補充有2.5-10mg/l?2，4-二氯苯氧乙酸的培養基中至少6-10周，但優選6周。

11.如權利要求1所述的方法，其中第二培養基包括補充有0.5-8mg/l?6-芐基氨基嘌呤和0.1-0.8mg/l吲哚-3-丁酸或吲哚-3-乙酸，但是優選2.0mg/l?6-芐基氨基嘌呤和0.2mg/l吲哚-3-丁酸或吲哚-3-乙酸的基本MS培養基。。

12.如權利要求1所述的方法，其中將含愈傷組織的易感應外植體在第二培養基中放置至少6-10周，但優選6周后。

13.如權利要求1所述的方法，其中第三培養基包括補充有0.5-8.0mg/l優選2.0mg/l的6-芐基氨基嘌呤的茁長素游離基本MS培養基。

14.如權利要求1所述的方法，其中將易感應的生根外植體在第三培養基中放置至少4-10周，但優選4周后。