[發明專利]由茶樹葉生產微體幼芽的一步法

無效

• 申請號: 01109826.0
• 申請日: 2001-03-20
• 公開（公告）號: CN1375190A
• 公開（公告）日: 2002-10-23
• 發明（設計）人: 因德拉·桑達爾;阿米塔·巴塔查里亞;馬杜·夏爾馬;P·S·阿胡賈
• 申請（專利權）人: 科學與工業研究委員會
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 隆天國際專利商標代理有限公司
• 代理人: 鄭霞,楊淑媛

1.一種從茶樹葉外植體生產微幼芽的新的一步方法，它包括約10-16周，其中：

(a)切除來源于用于愈傷組織誘導的體外培養的茶樹植物的外植體，該外植體在補充有選自維生素B₁-HCl(0.05-2.0mg/l)、維生素B₆-HCl(0.25-1.5mg/ml)和煙酸(0.25-1.5mg/l)與甘氨酸(1.0-3.0mg/l)、2，4-二氯苯氧乙酸(5.0-10mg/l)的維生素的標準基本Murashige和Skoog培養基中保持2-4周，優選2周后，

(b)4-6周后將愈傷組織培養物保持在用于生根或根形成的同樣但部分減少了的培養基中，

(c)4-6周后使生根愈傷組織在同樣但幾乎干燥且減少了的培養基中生根，

(d)將用于繁殖的步驟(c)形成的幼芽轉移至含補充有5μM苯基噻二唑基脲的液體培養基的繁殖培養基中，

(e)切斷長幼芽的末端至少約3.0cm，用吲哚-3-丁酸處理幼芽末端20-30分鐘、將其轉移并保持在含沙土混合物(1∶1)的廣口瓶中至少60-75天得到小植株，

(f)將小植株轉移至開口的塑料罐中得到健壯的有活力的茶樹。

2.如權利要求1所述的方法，其中外植體是選自Chinary、Assamica和Cambod的茶葉栽培品種。

3.如權利要求1所述的方法，其中通過誘導葉外植體中的分生組織的活性，來源于任何茶樹栽培品種及其雜交體的葉外植體被用于間接幼芽形成。

4.如權利要求1所述的方法，其中通過誘導葉外植體中的分生組織的活性，來源于生長體內和體外條件下的選擇性植物的任何茶樹栽培品種的葉外植體被用于間接幼芽形成。

5.如權利要求1所述的方法，其中使用的是來源于任何折疊至完全展開的葉子的葉外植體。

6.如權利要求1所述的方法，其中外植體是從幼芽尖端的第二和第三葉切除的。

7.如權利要求1所述的方法，其中培養基包括標準的基本瓊脂固化(0.8-1.0％)Murashige和Skoog培養基，該培養基的pH為5.8、補充有維生素例如維生素B₁-HCl(0.05-2.0mg/l)、維生素B₆-HCl(0.25-1.5mg/ml)和煙酸(0.25-1.5mg/l)與甘氨酸(1.0-3.0mg/l)、以及最重要的2.5-10mg/l的2，4-二氯苯氧乙酸，優選10.0mg/l。

8.如權利要求1所述的方法，其中外植體被置于步驟(i)的補充有2.5-10mg/l的2，4-二氯苯氧乙酸的培養基中至少10-16周，優選12周。

9.如權利要求1所述的方法，其中植物生長調節劑的茁長素選自吲哚-3-丁酸、吲哚-3-乙酸、萘乙酸和2，4-二氯苯氧乙酸。

10.如權利要求1所述的方法，其中僅一種茁長素是用于葉外植體的健壯幼芽的再生。

11.如權利要求1所述的方法，其中僅使用了可高壓滅菌的9.0cm陪替氏培養皿中的25ml培養基。

12.如權利要求1所述的方法，其中不需要穿戴培養，并且本方法是簡單的一步法。

13.如權利要求1所述的方法，其中在52μmolm^-2s^-1的冷熒光下的16小時光照期被用于所有培養物且培養基的pH為5.6-5.9。