[發明專利]由茶樹葉生產微體幼芽的一步法

無效

• 申請號: 01109826.0
• 申請日: 2001-03-20
• 公開（公告）號: CN1375190A
• 公開（公告）日: 2002-10-23
• 發明（設計）人: 因德拉·桑達爾;阿米塔·巴塔查里亞;馬杜·夏爾馬;P·S·阿胡賈
• 申請（專利權）人: 科學與工業研究委員會
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 隆天國際專利商標代理有限公司
• 代理人: 鄭霞,楊淑媛

本發明涉及一種由茶樹葉生產微體幼芽的新一步法。

茶是一種受歡迎的具有抗癌特性的含咖啡因飲料(Jankun等，為什么飲茶可以預防癌癥，《自然》(Nature)5：561；1997)。雖然山茶屬有許多種，但僅C.sinensis(L.)O.Kuntze或茶及其諸如Chinary、Assamica和Cambod的不同栽培品種在商業上是很重要的(Braua?D.N.“茶樹貿易”于Barua?D.N.編輯，《茶葉栽培中的科學和實踐》中，加爾各答茶研究協會；53-68；1989)。

茶葉栽培不僅是重要的職業提供源、而且也是世界所有茶葉生長地區掙取外匯的主要途徑(Wilson，K.C.編輯的《咖啡、可可和茶》中的“植物學和植物改良”，CABI出版，Wallingford，UK：167-173；1999)。但是，茶葉的總產量不足以滿足本國和世界市場的需要(Kabra，G.D.，1999年茶葉統計資料，《茶時代》(Tea?time)Vol?VIII，No.3?9-11，99，30-31；1999)。由于不同的生命性的(真菌、害蟲和病毒)和非生命的(冰凍、冰雹、寒冷、干旱、營養不良等)應力使茶葉的產率和質量進一步降低(Wilson，K.C.編輯的《咖啡、可可和茶》中的“植物學和植物改良”，CABI出版，Wallingford，UK：167-173；1999)。

實際屬于木本樹種的茶樹具有較長的生活周期以及高度自身不相容性和近親繁殖蕭條(Barua?D.N.編輯，《茶葉栽培中的科學和實踐》中的Barua?D.N.“茶樹貿易”，加爾各答茶研究協會；53-68；1989)，這通常限制了通過常規的育種方法生產高產率且優等和抗應力茶樹。因此，生物技術方法的應用是一種有效且可供選擇的方法。但是，預先必備一種有效率且能繁殖的再生方法對于生物技術應用是最重要的。

茶葉中的最嚴重問題是水皰枯萎病，因為它侵害用于制茶的葉子和幼芽，結果產率下降了50％。因此，抑制水皰枯萎病對于彌補這些損失是非常急需的。已確定了一些具有高產率和高質量但易患水皰枯萎病的克隆，因此需要通過諸如葉外植體的同源組織的生物技術改良，因為諸如子葉外植體的異質組織會導致基因分離和所需的高產率和高質量的特性的喪失。因此，現存的方法在于諸如子葉外植體的異質組織不具有上述有關用途并且還需要保持優良植物特性類型的準確。因此，急需發展采用同源組織的微體繁殖的方法。葉外植體的再生是最佳的優選，因為：

(i)葉外植體是同源的；

(ii)葉外植體的再生總是產生忠實于原始的選擇性優良特性類型的植物；

(iii)葉子含有極大量復制數的葉綠體DNA，因此在進行任何基因操作時如轉基因或體細胞雜交的研制中使用葉子，則葉子表達可以擴增數倍；

(iv)葉子為任何基因操作技術提供了大量表面；

(v)葉子是市售的成品茶的主要商業來源；

(vi)葉子提供了豐富的原料供應；

(vii)采用葉子作為外植體不會防礙一般的好的特性和植物的生長；

倘若在再生過程中沒有出現體細胞克隆變異，那么通過體細胞雜交或通過轉基因技術的生物技術作物改良通常需要經愈傷組織相的再生。由于茶樹壽命長，與快速生長的草本植物相比，愈傷組織相中的染色體變異的可能性要低。因此，本申請報道了使用經愈傷組織相的微體繁殖茶樹的有效一步法。如果使用葉外植體或如果植物為50年或更長的非常老的樹，木本植物的再生能力很差。

為了產生經體細胞胚胎發生的植物或經愈傷組織相的未定形幼芽形成，但要么轉化頻率低(4-6％)或要么生根很少，已將葉外植體用于山茶屬的其它觀賞植物種中，即C.japonica和C.reticulata(Sanjose，M.C.和Vieitez，A.M.成熟Camellia?reticulata的體外葉子的未定形幼芽再生，《園藝科學雜志》(J.Hort.Sci.)67：677-683；1992；Sanjose，M.C.和Vieitez，A.M.“通過胚胎發生和柄莖發生來源于葉外植體培養物的山茶屬小植株的再生”，《園藝科學》(Sci.Horti.)，54：303-315；1993；Pedroso，M.C.和Pais，M.S.的C.japonica?L.葉中的直接胚胎形成”，《植物細胞再配(Rep.)》12：639-643；1993)。而且，這些均是觀賞植物種。但是，沒有有關通過茶即商用的山茶屬或茶樹中的愈傷組織、用于未定形幼芽形成的葉外植體的植物再生的方法的報道。至今也沒有從茶或任何其它觀賞植物種中的葉外植體再生幼芽的一步法的報道。