[發明專利]簡單快速的mRNA層析芯片檢測技術

無效

• 申請號: 01105979.6
• 申請日: 2001-04-13
• 公開（公告）號: CN1381589A
• 公開（公告）日: 2002-11-27
• 發明（設計）人: 繆金明
• 申請（專利權）人: 繆金明
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.本發明涉及mRNA快速層析芯片的技術和方法，可用于基因表達譜的研究和基因活動狀態的鑒別，該技術步驟包括：

a)將cDNA探針或寡核苷酸探針陣列于微孔纖維膜上，制成膜條陣列芯片；

b)將含有mRNA的細胞或樣本用強烈變性劑溶解，釋放RNA；

c)稀釋并調節變性劑溶液的離子濃度，75℃加溫變性RNA；

d)加入生物素標記的Poly(T)和親和素包被的膠體金顆粒溶液；

e)將膜條芯片的一端浸入變性劑溶液，另一端與吸水纖維相連，層析雜交樣本，顯示信

??號；

f)銀還原信號加強，信號分析。

2.根據權利要求1所描述的膜條陣列芯片，其特征在于將cDNA探針或合成的寡核苷酸探針通過畫線或點樣的方式排列并固定在可層析的微孔膜上；膜的材料為硝酸纖維素膜、PVDF膜、尼龍膜和以這些膜為基礎發展而來的帶有陽離子或陰離子的膜。

3.根據權利要求1所描述的膜條陣列芯片，其特征在于芯片呈條形，cDNA探針或寡核苷酸探針陣列固定于膜條的中間區域，陣列可以為條形碼樣排列或點陣陣列。

4.根據權利要求1所描述的強烈變性劑釋放RNA，其特征在于直接采用強力變性劑變性處理細胞或組織樣本，使之釋放核酸，同時抑制RNA酶對RNA的降解，變性劑包括硫氰酸胍、異硫氰酸胍、硫氰酸鉀、三氟醋酸鹽、三氯醋酸鹽、過氯酸鹽、碘化鈉等，變性劑的濃度依所溶解的樣本有所不同，典型的濃度是3～6M。

5.根據權利要求1所描述的RNA變性劑稀釋和RNA變性，其特征在于，檢測時將生物素標記的poly(dT)片段和親和素包被的膠體金試劑與RNA強烈變性劑溶劑等體積的6×SSC混合，并加到RNA變性劑溶液中，混合，其目的是調節雜交液的離子強度同時對強烈變性劑作稀釋以減少對親和素的損傷。

6.根據權利要求1所描述的層析雜交技術，其特征在于當RNA抽提溶液與生物素-poly(dT)以及親和素包被的膠體金等混合后，將膜的一端浸入混合溶液，另一端與吸水纖維相連，由于層析效應，流動相帶動樣品沿膜載體展開，靶RNA-poly(dT)-生物素-親和素-膠體金復合物會被相應的固定探針俘獲，并在相應的條帶位置呈現陽性的紅色膠體金檢測信號。

7.根據權利要求1所描述的銀還原信號加強法，其特征是先進行膠體金層析顯色，再通過銀顯影液(乳酸銀顯影液、硝酸銀顯影液)復染，使其在膠體金部位的銀被還原形成黑色顆粒，使信號加強10～100倍。