[發(fā)明專利]乙肝病毒前S1抗體酶免測定試劑盒及制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 01105293.7
• 申請日: 2001-02-01
• 公開（公告）號: CN1368638A
• 公開（公告）日: 2002-09-11
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 杜鳳鳴
• 申請（專利權(quán)）人: 上海新新醫(yī)學(xué)生物工程公司;杜鳳鳴
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53;G01N33/531;G01N33/576
• 代理公司: 上海新天專利代理有限公司
• 代理人: 王巍

本發(fā)明涉及生物技術(shù)試劑，具體涉及一種乙肝病毒前S₁抗體酶免測定試劑盒及制備方法。

乙型肝炎病毒(HBV)的DNA序列分析表明HBV基因的S區(qū)由S、前S1、前S2所組成，其編碼的蛋白有主要蛋白(HBsAg)，中分子蛋白(HBsAg加前S2)和大分子蛋白(HBsAg，前S2和前S1)，因前S1蛋白存在于大分子蛋白中，故感染血液中的前S1蛋白全部存在于HBsAg陽性血清中，前S1蛋白由108個或119個氨基酸組成，其長度因亞型而異，ayw亞型為108aa，adw亞型有119個aa，前S1蛋白位于病毒顆粒的表面，因而它具有高度的免疫原性。Milich以大分子蛋白免疫小鼠，然后做前S1各段合成肽的T細(xì)胞增殖試驗，實驗顯示，前S1肽鏈的P1-21，12-32和94-117三段多肽可以引起的T細(xì)胞明顯增殖，說明該三段氨基酸序列具有免疫原性，是免疫決定簇區(qū)，而P32-53及P74-89肽段不能在體外使T細(xì)胞增殖，提示該二段序列無免疫原性。對P1-21及12-32肽段的進一步研究，在用P12-32肽段免疫小鼠后，再用1-21和12-32可以引起相同的T細(xì)胞增殖，提示這二肽段的共同序列即P12-21是重要的抗原決定簇區(qū)，起了主要的激活作用。用更短肽鏈的實驗結(jié)果又顯示，P12-19的免疫活性只及P12-21的1.6％，P14-21的活性只及P12-21的0.4％，也即去掉P12-21氨基酸端或羧基端的氨基酸，就極度影響了P12-21的免疫原性，證實了引起T細(xì)胞對免疫原性識別的最小氨基酸數(shù)為10肽。在P12-21肽中，分別替代其中的第14，18和19位，免疫原性分別只相當(dāng)于肽鏈的66.6％，0.7％和1.6％，說明P12-21的10肽中，第18和19位氨基酸對免疫原性最為重要。這對合成前S1多肽抗原有較高參考價值。而Alberti用P21-32，32-47及94-117三段前S1多肽均能檢測到急性乙肝患者血清中的相應(yīng)抗體，說明P32-53并非沒有免疫原性，并且從前S1抗體的動力學(xué)態(tài)勢分析，抗P32-47的前S1抗體具有更為重要的作用。多數(shù)急性乙肝患者早期先出現(xiàn)P32-47抗體，然后出現(xiàn)P21-32和P94-117抗體，有的患者只出現(xiàn)P32-47抗體，而另二種抗體始終陰性。在恢復(fù)順利的急性乙肝中，P94-117抗體均與P32-47抗體同時存在，沒有單獨P94-117抗體陽性的情況，而在慢性乙肝中，往往就只有P94-117抗體而無另二種抗體，由此可見，P32-47及P21-32抗體多數(shù)出現(xiàn)于預(yù)后較好的急性乙肝中，而單獨P94-117抗體陽性一般為慢性肝炎。

黑猩猩的感染實驗證明，血清前S1抗原蛋白最早可在感染后的第5周從電泳帶上檢測到，至第8周血清中出現(xiàn)抗前S1抗體，18周時前S1抗原消失，在直至36周的整個觀察期間，前S1抗體始終陽性，而抗HBs直至33周才出現(xiàn)，因為乙肝的潛伏期為6周-6個月，所以大多數(shù)急性乙肝發(fā)病時，抗前S1抗體就可呈現(xiàn)陽性結(jié)果，它是乙肝早期診斷的可靠指標(biāo)。

前S1抗體一般出現(xiàn)于急性自限性乙肝中，而慢性化發(fā)展的急性乙肝及HBsAg長期攜帶者，該抗體的檢出率都很低。Theilmanm報道入院時血清中前S1抗體陽性的4例急性乙肝均順利康復(fù)，而6例前S1抗體陰性的未能康復(fù)而轉(zhuǎn)為慢性，10例HBsAg攜帶者該抗體全部陰性。說明血清中出現(xiàn)前S1抗體是病情預(yù)后良好的早期信號。Budkowska也指出急性乙肝順利康復(fù)的患者均有前S1抗體，而急性乙肝慢性化以及前S1抗原持續(xù)陽性的慢性肝炎中都檢測不到前S1抗體。前S1抗體促進疾病康復(fù)的機理可能是前S1抗體發(fā)揮了PHSA的競爭抑制作用，抗體封閉了前S1抗原和肝細(xì)胞上的PHSA受體，使PHSA不能發(fā)揮“橋連”作用，從而阻斷了HBV進入肝細(xì)胞的途徑。另外，前S1抗體特異性地與HBV上前S1抗原結(jié)合后，通過其它免疫途徑發(fā)揮了清除病毒的作用，因此，前S1抗體是體內(nèi)的中和性抗體。近十多年來，眾多國外研究報告顯示，乙肝病毒的前S1抗體是中和性抗體，具有阻止病毒復(fù)制和清除病毒的作用，它是乙肝疾病呈現(xiàn)恢復(fù)趨向的最早期信號，在了解病情和判斷預(yù)后方面較二對半項目更為直接和及時。因此，它是乙肝疾病的早期恢復(fù)指標(biāo)，抗前S1抗體幾乎與HBsAg及抗HBc同時出現(xiàn)于血清中，所以它又是乙肝感染的早期診斷指標(biāo)。