[發明專利]核酸網狀分枝擴增技術

無效

• 申請號: 01104108.0
• 申請日: 2001-02-20
• 公開（公告）號: CN1317576A
• 公開（公告）日: 2001-10-17
• 發明（設計）人: 張永
• 申請（專利權）人: 張小麗;張永;劉宣力
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術范圍：本發明是一項全新的核酸擴增技術，具有多項特性。適用于快速檢測傳染性病原體，和正常或異常基因；以及基因組的表達；抗原、抗體檢測，及蛋白質的定性、定量檢查。實用于血液病、腫瘤、傳染病、法醫學、血庫以及遺傳性疾病的診斷，以及新藥的研究與開發。

發明背景：目前，有許多用于快速準確檢測異常基因或病原體的方法。例如，聚合酶鏈反應(PCR)；連接酶鏈反應(LCR)；鏈取代擴增(SDA)；以及轉錄擴增(TBA)等技術均為檢測微量病原體核酸序列的有效方法。然而，上述所有技術都有不足之處，PCR需要昂貴的設備，而且擴增溫度須隨靶核酸的不同而不同。為此，給臨床的實際檢測工作帶來了諸多不便，這些困難在對于定量PCR和多個靶核酸的DNA/RNA檢測時，顯得尤為突出。至于其他的原位擴增和檢測，由于加熱所造成的形態學的改變，小擴增產物的擴散及重復性差等問題的存在，使其技術難度甚高，難以應用于臨床檢測，此外，蛋白質檢測，由于敏感度低，臨床應用受到限制。

優異性：1、本發明方法，利用DNA多聚酶引物的延伸及分離特性，使同一種酶能完成引物延伸，及網狀分枝擴增。因此，百萬倍擴增可在同一溫度下短時間內順利完成。此外，網狀雜交擴增可在無酶參與情況下完成，因而更為簡單而方便。

2、網狀分枝擴增使用通用引物，在同一反應試管中可同時檢測多個靶核酸。

3、由于靶核酸捕獲，環狀擴增反應，以及檢測三步驟，都可在同一固體支持物上完成。從而，簡化了檢測方法，使其可在一般診所，臨床化驗室，甚至露天中操作，具有很強的實用，應用價值。

4、本發明方法，使分離、擴增、檢測靶核三步驟可在同一反應試管中完成；并運用連接反應，即結合靶核酸的環狀探針，能特異地與引物連接區相結合。因此，這一特性可被用于檢測單一堿基突變，如廉刀細胞性貧血，或K-ras癌基因。

5、網狀雜交擴增技術，可用于核酸檢測，以及蛋白質檢測。包括抗原、抗體、氨基酸和固體支持物，此方法檢測快速，簡潔，無需任何酶學反應參與。

圖1是環狀擴增探針圖，圖2是網狀分枝擴增圖，圖3是網狀雜交擴增圖，圖4是延伸網狀擴增圖，圖5是環狀擴增圖，圖6是網狀雜交擴增圖，圖7是熒光探針圖。