[發明專利]將二倍體轉變成單倍體用于遺傳診斷

無效

• 申請號: 00814879.1
• 申請日: 2000-10-06
• 公開（公告）號: CN1384887A
• 公開（公告）日: 2002-12-11
• 發明（設計）人: B·沃戈爾斯滕;K·W·金澤勒;H·炎;N·派帕多普勒斯
• 申請（專利權）人: 約翰斯霍普金斯大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/06;C12N5/16;C12N5/26
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所
• 代理人: 唐偉杰

1.用于檢測非嚙齒類哺乳動物目的基因中的突變的方法，包括下列步驟：

融合非嚙齒類哺乳動物細胞與嚙齒類細胞受者，以形成非嚙齒類哺乳動物-嚙齒類雜交細胞；

通過選擇嚙齒類染色體所含第一標記和第一非嚙齒類哺乳動物染色體所含第二標記來選擇融合后雜交細胞，以形成融合后雜交細胞群體；

在融合后雜交細胞群體中檢測對于第二非嚙齒類哺乳動物染色體而言是單倍體的雜交細胞亞群，所述第二非嚙齒類哺乳動物染色體與第一非嚙齒類哺乳動物染色體不是相同染色體，而且沒有經過選擇；

分析雜交細胞亞群以檢測所述基因或其mRNA產物中的突變，其中該基因位于第二非嚙齒類哺乳動物染色體上。

2.權利要求1的方法，其中嚙齒類細胞是二倍體。

3.權利要求1的方法，其中嚙齒類細胞受者是錯配修復缺陷的。

4.權利要求1的方法，其中嚙齒類細胞受者是遺傳霉素抗性的。

5.權利要求1的方法，其中嚙齒類細胞受者經癌基因轉化。

6.權利要求5的方法，其中癌基因是ras。

7.權利要求5的方法，其中癌基因是E1A。

8.權利要求1的方法，其中嚙齒類細胞受者經ras和E1A癌基因轉化。

9.權利要求1的方法，其中嚙齒類細胞受者是MSH2。

10.權利要求1的方法，其中嚙齒類細胞受者是二倍體而且包含可選擇標記和反選擇標記。

11.權利要求10的方法，其中反選擇標記是HPRT缺陷。

12.權利要求1的方法，其中還包括步驟：

在融合后雜交細胞群體中檢測第三非嚙齒類哺乳動物染色體，其中第一、第二、和第三非嚙齒類哺乳動物染色體是不同的，而且第二和第三非嚙齒類哺乳動物都沒有經過選擇。

13.權利要求1的方法，還包括步驟：

在融合后雜交細胞群體中檢測第三和第四非嚙齒類哺乳動物染色體，其中第一至第四非嚙齒類哺乳動物染色體是不同的，而且第二至第四非嚙齒類哺乳動物染色體都沒有經過選擇。

14.權利要求12的方法，其中還包括步驟：

測試所述雜交細胞亞群以檢測第二基因的mRNA產物或所述第二基因的蛋白質產物，其中第二基因位于第三非嚙齒類哺乳動物染色體上，其中來自所述第二基因的所述mRNA或蛋白質產物的量降低或所述mRNA或蛋白質產物的特性改變指示該非嚙齒類哺乳動物的第二基因中存在突變。

15.權利要求13的方法，其中還包括步驟：

測試所述雜交細胞亞群以檢測第二和第三基因的mRNA產物或所述第二和第三基因的蛋白質產物，其中第二和第三基因位于第三和第四非嚙齒類哺乳動物染色體上，其中所述第三或第四基因的所述mRNA或蛋白質產物的量降低或者所述mRNA或蛋白質產物的特性改變指示該非嚙齒類哺乳動物的第三或第四基因中存在突變。

16.權利要求1的方法，其中非嚙齒類哺乳動物細胞是淋巴細胞。

17.權利要求1的方法，其中檢測對于第二非嚙齒類哺乳動物染色體而言是單倍體的雜交細胞亞群的步驟是通過鑒定第二非嚙齒類哺乳動物染色體上的微衛星標記而實現的。

18.權利要求1的方法，其中分析以檢測突變的步驟是通過選自下組的技術而進行的：核酸測序、等位基因特異性PCR、等位基因特異性雜交、微陣列雜交、不連續梯度凝膠電泳(DGGE)、和自動化核酸測序。