[發明專利]核糖－核糖醇－磷酸之寡糖衍生物及含有它們的疫苗

有效

• 申請號: 00813473.1
• 申請日: 2000-08-15
• 公開（公告）號: CN1376158A
• 公開（公告）日: 2002-10-23
• 發明（設計）人: V·G·韋茲本科莫;R·羅伊
• 申請（專利權）人: 哈瓦那大學;渥太華大學
• 主分類號: C07H15/04
• 分類號: C07H15/04;A61K39/102
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所
• 代理人: 樊衛民

技術部分

本發明涉及醫藥領域，尤其涉及核糖-核糖醇-磷酸衍生的寡糖混合物之化學合成，并涉及含有該寡糖混合物的疫苗，其中所述寡糖混合物被用作疫苗中的活性成分，用于防止由流感嗜血菌(Haemophilus?influenzae)b型(Hib)引起的感染。

現有技術

在世界范圍內，流感嗜血菌b型嚴重威脅著人類健康。該細菌主要對5歲以下兒童引起腦膜炎、肺炎、會咽炎以及其它呼吸道疾病。觀察到的后果是：在許多國家，該疾病存活者中30％以上有從聽覺問題到重度精神發育遲緩的問題。世界衛生組織的最近估算表明世界上每年超過550000的兒童死于由流感嗜血菌b型引起的疾病。

純化的流感嗜血菌莢膜多糖可在成人中誘導保護性免疫，但對兒童則誘導很低的免疫反應，特別是2歲以下的嬰兒對其沒有免疫反應。

莢膜多糖具有以下結構：

已經表明主要問題是抗原的自身特性，由于它是一種多糖，為T細胞不依賴性抗原，不能刺激尚未成熟之嬰兒的免疫系統。已表明該問題可通過將多糖與公知為載體的蛋白質共價連接(結合)而解決。這樣得到的產物公知為結合疫苗，其可誘導2個月大的嬰兒產生保護性水平的抗體。

Chu等人，(感染免疫(Infection?immunity)1983，40，245-256)將天然的莢膜多糖與溴化氰活化的破傷風類毒素偶聯，獲得了結合物。

Gordon(美國專利號4,496,538)用溴化氰活化天然的多糖，然后將它通過已二酸二酰肼與白喉類毒素偶聯。

Hilman等人(美國專利號4,459,286)將經最初活化后的天然多糖通過6-氨基己酸與腦膜炎球菌的外膜蛋白偶聯。

在所有上面的結合方法中，共價連接是在莢膜多糖和載體蛋白質的幾個基團之間進行的。

對嬰兒誘導保護性免疫的能力依賴于偶聯物的結構。當使用在的多糖進行偶聯時，由于參與連接的基團隨機分布在多糖鏈上，從而使每一批的表征變得很復雜。

通過物理化學方法對所有這些疫苗進行分析是非常困難的；因此常規方法是通過研究對實驗動物的免疫原性，從而對每一批進行評價。但是偶聯物對兒童與它對實驗動物的行為是不同的。

按照世界衛生組織(WHO)的穩定質量標準(M.R.Holliday和C.Jones，生物學(Biologicals)，1999，27，51-53)，偶聯疫苗的控制應基于使用物理化學方法來闡明批與批之間的相似性。

為了促進這項工作，更應該在分子水平上定義偶聯疫苗。解決該問題的另一方法是合成莢膜多糖片段。通過合成來構建流感嗜血菌b型抗原的方法有兩步主要步驟：合成二糖中間體以及其寡聚化。針對該合成已經研究了一些途徑。

Beuvery等人(歐洲專利申請EPO0276516；美國專利5,034,519；四面體快報(Tetrahedron?Lett.)28，1553，1987)和Hoogerhout等人(糖化學雜志(J.Carbohydr.Chem)，7，1988，399-416)通過合成莢膜多糖片段而獲得，其中申請專利的莢膜多糖片段含有3至20個重復單位。為達到該目的，首先制備二糖中間體2，然后通過固相化學或溶液合成，制備含6個重復單位的寡聚體(Elie等人，Rec.Trav.Chim.Pays-Bas?108，1989，219)。寡聚體通過間隔臂與蛋白質或肽結合。在小鼠身上，偶聯物三聚體與市售的由莢膜多糖制備的疫苗一樣，具有免疫原性。

在一個優選的實施方案中，闡述了下述的合成途徑，使用了以下策略：1-合成核糖醇，2-與核糖偶聯，3-向核糖單位選擇性導入取代基，以及4-導入磷活化基團。用這種途徑，可在僅15個反應步驟后得到關鍵的二糖衍生物2。

總產率為7％(Hermans等人，Recl.Trav.Chim.Pays-Bas?1987，106，498-504)。進一步地，該方法有兩個主要的不足之處：該方法包括11次層析步驟；并且對寡聚化的處理而言，其關鍵中間物的保護基團不理想。

在寡聚化時，或合成的第二步，所用方法為通過活化磷酸三酯而進行的溶液合成，使得基于二糖的每個循環的產率在70-90％之間。此類步驟的主要不足之處在于：不可能制備含有多于4個重復單位的片段，因為其產率快速下降。二糖中間體2有三個不同的保護基團，這使得終產物的去保護非常困難。因此該二糖較不便于用固相化學法進行寡聚化作用。因為六聚體的合成已報道之故。