[發(fā)明專利]在無RNA酶和有機溶劑的條件下應(yīng)用切向流過濾來純化質(zhì)粒DNA的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 00813109.0
• 申請日: 2000-07-21
• 公開（公告）號: CN1378592A
• 公開（公告）日: 2002-11-06
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 米歇爾·D·巴特勒;達里恩·L·科恩;戴維·卡恩;馬喬里·E·溫克勒
• 申請（專利權(quán)）人: 杰南技術(shù)公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務(wù)所
• 代理人: 巫肖南,黃益芬

????????????????????????發(fā)明背景

????????????????????????發(fā)明領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種純化質(zhì)粒DNA的方法。更明確的說，本發(fā)明提供一種簡單的、可放大的(scalable)方法，其利用了切向流過濾，從而比傳統(tǒng)的基于堿裂解的方法獲得更多的高純度質(zhì)粒。

????????????????????相關(guān)領(lǐng)域的描述

從細胞培養(yǎng)物中純化質(zhì)粒DNA是許多研究和藥學(xué)應(yīng)用的必要先決條件。一般而言，質(zhì)粒純化方法分為兩個階段，初步細胞破碎/質(zhì)粒分離步驟和隨后的一個或多個連續(xù)的純化步驟。初始的分離步驟的最常用方法是兩種方法的改進法：一種方法是采用煮沸使質(zhì)粒釋放(Holmes和Quigley，Anal.Biochem.，114：193-197(1981))，第二種方法是采用堿性pH和清潔劑引起細菌膜的溶解(Birnboim和Doly，Nucleic?Acids?Res.，7：1513-1523(1979))。這兩種方法都使質(zhì)粒DNA從其細胞溶質(zhì)的位置釋放。

除了常用氯化銫梯度超離心(Clewell和Helinski，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，62：1150-1152(1969))外，下游純化步驟常涉及從雜質(zhì)中選擇性沉淀質(zhì)粒(Lis和Schleif，Nucleic?Acids?Res.，2：383-389(1975)；Ishaq等.，Biotechniaues，9：19-24(1990)；Kondo等.，Anal.Biochem.，198：30-35(1991)；Chakrabarti等.，Biotech.APPl.Biochem.，16：211-215(1992))，和/或采用柱層析(Horn等.，Human?Gene?Ther.，6：565-573(1995)；美國專利5,707,812；Chandra等.，Anal.Biochem.，203：169-172(1992)；Marquet等，BioPharm：26-37(1995)；Johnson和Ilan，Anal.Biochem.，132：20-25(1983)；Vincent和Goldstein，Anal.Biochem.，110：123-127(1981))。柱層析方案基于反相(Edwardson等.，Anal.Biochem.，152：215-220(1986)；Johnson等.，Biotechniaues，4：64-70(1986)；van?Helden和Hoal，New?Nucleic?AcidTechniques，Walker編(Humana?Press：Clifton，NJ，1988)，pp.61-74))，普通相(Marko等.，Anal.Biochem.，121：382-387(1982))，離子交換(Perbal，APractical?Guide?to?Molecular?Cloning(Wiley：New?York，1984)，pp.165-175；Colman等.，Eur.J.Biochem.，91：303-310(1978)；Garon和Petersen，Gene?Anal.Tech.，4：5-8(1987)；Kim和Rha，Biotech.Bioeng.，33：1205-1209(1989)；Ohmiya等.，Anal.Biochem.，189：126-130(1990))，大小排阻層析(Van?Helden和Hoai，同上；Perbal，同上；Cornelis等.，Plasmid，5：221-223(1981)，Micard等.，Anal.Biochem.，148：121-126(1985)；Moreau等.，Anal.Biochem.，166：188-193(1987)；Raymond等.，Anal.Biochem.，173：125-133(1988)；Hansen和Rickett，Anal.Biochem.，179：167-170(1989))，和混合式(Flanagan?et，Anal.Biochem.，153：299-304(1986))方法。