[發明專利]在無RNA酶和有機溶劑的條件下應用切向流過濾來純化質粒DNA的方法

無效

• 申請號: 00813109.0
• 申請日: 2000-07-21
• 公開（公告）號: CN1378592A
• 公開（公告）日: 2002-11-06
• 發明（設計）人: 米歇爾·D·巴特勒;達里恩·L·科恩;戴維·卡恩;馬喬里·E·溫克勒
• 申請（專利權）人: 杰南技術公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務所
• 代理人: 巫肖南,黃益芬

1.一種從含有質粒DNA的原核細胞中純化該質粒DNA的方法，其包括下述步驟：

(a)消化所述細胞；

(b)在不對RNA進行酶促消化的前提下，將這些細胞培養約4到24小時，以便實施裂解和溶解；

(c)除去細胞裂解物的雜質，以獲得一種質粒DNA溶液；

(d)使所述溶液流經切向流過濾裝置而過濾，獲得含有質粒DNA的回流液；

(e)收集這種回流液。

2.權利要求1所述方法，其中所述細胞是細菌細胞。

3.權利要求1所述方法，其中所述細胞是大腸桿菌的細胞。

4.權利要求1所述方法，其中所述質粒DNA的大小為大約2到50kb。

5.權利要求1所述方法，其中步驟(a)采用溶菌酶進行。

6.權利要求1所述方法，其中步驟(b)進行約10到24小時。

7.權利要求1所述方法，其中步驟(b)進行約20到24小時。

8.權利要求1所述方法，其中所述培養步驟在堿性條件下進行。

9.權利要求1所述方法，其中所述培養步驟在洗滌劑存在的條件下進行。

10.權利要求8所述方法，其中所述培養步驟在洗滌劑存在的條件下進行。

11.權利要求9所述方法，其中所述洗滌劑是離子型的。

12.權利要求11所述方法，其中所述洗滌劑是陰離子型的。

13.權利要求12所述方法，其中所述洗滌劑是十二烷基磺酸鈉、膽酸、去氧膽酸。

14.權利要求1所述方法，其中步驟(c)通過離心使裂解物的雜質與質粒DNA分離，得到作為上清液的質粒DNA溶液。

15.權利要求1所述方法，其中所述過濾裝置帶有截留分子量大于約500kD的膜。

16.權利要求1所述方法，其還包括從回流液中回收質粒DNA。

17.權利要求1所述方法，還包括用一種緩沖液對所述回流液進行透析。

18.權利要求1所述方法，還包括對所述回流液進行離子交換層析。

19.一種組合物，其含有按照權利要求1的方法制備的質粒DNA。