[發明專利]突變型Tn5轉座酶及其使用方法

無效

• 申請號: 00811220.7
• 申請日: 2000-08-02
• 公開（公告）號: CN1367840A
• 公開（公告）日: 2002-09-04
• 發明（設計）人: W·S·列茲尼科夫;T·A·瑙曼
• 申請（專利權）人: 威斯康星校友研究基金會
• 主分類號: C12N15/90
• 分類號: C12N15/90;C12N15/10;C12N9/22
• 代理公司: 上海專利商標事務所
• 代理人: 徐迅

1.一種相對于野生型Tn5轉座酶蛋白質修飾的突變型Tn5轉座酶蛋白質，其特征在于，所述的突變型轉座酶與野生型蛋白質的差異在于選自以下的位點：氨基酸58和氨基酸372位，其中與Tn5外末端相比，該突變型Tn5轉座酶蛋白質更偏愛Tn5的內末端。

2.如權利要求1所述的突變型Tn5轉座酶，其特征在于，所述的轉座酶在氨基酸58位含有纈氨酸。

3.如權利要求1所述的突變型Tn5轉座酶，其特征在于，所述的轉座酶在氨基酸372位含有突變。

4.如權利要求1所述的突變型Tn5轉座酶，其特征在于，所述的轉座酶在氨基酸372位含有谷氨酰胺。

5.如權利要求1所述的突變型Tn5轉座酶，其特征在于，所述的突變型轉座酶與野生型蛋白質的差異在于氨基酸58位和372位。

6.如權利要求1所述的突變型Tn5轉座酶，其特征在于，所述的轉座酶在氨基酸58位含有纈氨酸且在氨基酸372位含有谷氨酰胺。

7.如權利要求1所述的突變型Tn5轉座酶，其特征在于，所述的突變型轉座酶與野生型Tn5轉座酶的差異在于選自以下位點的差異：氨基酸8位和氨基酸344位。

8.如權利要求7所述的突變型Tn5轉座酶，其特征在于，所述的轉座酶在氨基酸8位為半胱氨酸。

9.如權利要求7所述的突變型Tn5轉座酶，其特征在于，所述的轉座酶在氨基酸344位為賴氨酸。

10.如權利要求7所述的突變型Tn5轉座酶，其特征在于，所述的突變型Tn5轉座酶與野生型Tn5轉座酶的差異在于氨基酸8位和氨基酸344位。

11.如權利要求1所述的突變型Tn5轉座酶，其特征在于，所述的轉座酶在氨基酸8位含有半胱氨酸和在氨基酸344位含有賴氨酸。

12.如權利要求1所述的突變型Tn5轉座酶，其特征在于，所述的轉座酶在氨基酸8位含有半胱氨酸、在氨基酸58位含有纈氨酸、在氨基酸344位含有賴氨酸和在氨基酸372位含有谷氨酰胺。

13.一種編碼權利要求1所述的轉座酶的多核苷酸。

14.一種編碼權利要求12所述轉座酶的多核苷酸。

15.一種用于體外轉座可轉座DNA序列的系統，其特征在于，所述的系統包括：

如權利要求1所述的相對于野生型Tn5轉座酶修飾的突變型Tn5轉座酶；

供體DNA分子，其包含可轉座DNA序列、該序列在5’和3’端側翼連接有野生型IE序列；和

可轉座元件可轉座入內的靶DNA分子。

16.如權利要求15所述的系統，其特征在于，所述的IE序列是甲基化的。

17.一種體外轉座的方法，其特征在于，所述的方法包括如下步驟：

在低于生理溫度的溫度下在合適的反應緩沖液中，將靶DNA分子和 1所述的突變型Tn5轉座酶與供體DNA分子混合，該供體DNA分子含有感興趣的可轉座DNA序列、而該感興趣的DNA序列在其5’和3’端側翼連接有野生型Tn5IE序列，進行反應直到修飾的轉座酶結合于此IE序列；和

將溫度升高至生理溫度一段時間，足以讓此酶催化體外轉座。