[發(fā)明專利]通過自我蛋白水解生產(chǎn)蛋白質(zhì)

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 00811071.9
• 申請日: 2000-08-07
• 公開（公告）號: CN1367837A
• 公開（公告）日: 2002-09-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: T·魯默納福;H－J·塞爾;J·溫迪什;F·克瑙斯德
• 申請（專利權(quán)）人: 生物化學(xué)有限公司
• 主分類號: C12N15/57
• 分類號: C12N15/57;C12N15/62;C12N15/70;C12N9/50;C12N1/21;C12P21/06;//C07K14/54;14/56;(C12N1/21;C12R119)
• 代理公司: 中國國際貿(mào)易促進(jìn)委員會專利商標(biāo)事務(wù)所
• 代理人: 唐偉杰

1.編碼含有第一種多肽和第二種多肽的融合蛋白的核酸分子，其中所述第一種多肽具有瘟病毒自我蛋白酶N^pro的自我蛋白水解活性，所述第二種多肽連接在該第一種多肽C末端使得其可以被第一種多肽的自我蛋白水解活性由融合蛋白質(zhì)切出，并且該第二種多肽是異源多肽。

2.權(quán)利要求1的核酸分子，其中瘟病毒選自CSFV、BDV和BVDV。

3.權(quán)利要求2的核酸分子，其中瘟病毒是CSFV。

4.權(quán)利要求3的核酸分子，其中第一種多肽包含如下氨基酸序列：(1)-MELNHFELLYKTSKQKPVGVEEPVYDTAGRPLFGNPSEVHPQSTLKLPHDRGRGDIRTTLRDLPRKGDCRSGNHLGPVSGIYIKPGPVYYQDYTGPVYHRAPLEFFDEAQFCEVTKRIGRVTGSDGKLYHIYVCVDGCILLKLAKRGTPRTLKWIRNFTNCPLWVTSC-(168)，

或者其具有自我蛋白水解活性的衍生物的氨基酸序列。

5.權(quán)利要求3的核酸分子，其中第一種多肽包含CSFV自我蛋白酶N^pro的Glu22到Cys168氨基酸序列或其具有自我蛋白水解活性的衍生物，其中第一種多肽額外地具有Met作為N端，并且異源多肽直接連接在CSFV自我蛋白酶N^pro的Cys168氨基酸上。

6.權(quán)利要求3的核酸分子，其中第一種多肽包含CSFV自我蛋白酶N^pro的Pro17到Cys168氨基酸序列或其具有自我蛋白水解活性的衍生物，其中第一種多肽額外地具有Met作為N端，并且異源多肽直接連接在CSFV自我蛋白酶N^pro的Cys168氨基酸上。

7.權(quán)利要求1到6任一項(xiàng)的核酸分子，其中核酸分子是DNA分子。

8.和預(yù)定細(xì)菌宿主細(xì)胞相容的表達(dá)載體，其包含權(quán)利要求1到7任一項(xiàng)的核酸分子，和至少一個表達(dá)調(diào)控序列。

9.權(quán)利要求8的表達(dá)載體，其中細(xì)菌宿主細(xì)胞是大腸桿菌細(xì)胞。

10.權(quán)利要求8或9的表達(dá)載體，其中表達(dá)載體是質(zhì)粒。

11.包含權(quán)利要求8到10任一項(xiàng)的載體的細(xì)菌宿主細(xì)胞。

12.權(quán)利要求11的細(xì)菌宿主細(xì)胞，其中所述宿主細(xì)胞是大腸桿菌細(xì)胞。

13.生產(chǎn)目標(biāo)異源多肽的方法，包括：

(I)培養(yǎng)權(quán)利要求11或12的細(xì)菌宿主細(xì)胞，其中培養(yǎng)是在可以引起融合蛋白質(zhì)的表達(dá)，并且在宿主細(xì)胞中經(jīng)第一種多肽的自我蛋白水解活性由融合蛋白質(zhì)自我蛋白水解產(chǎn)生異源多肽的條件下進(jìn)行的，和

(II)分離切割下來的異源多肽。