[發明專利]使用昆蟲細胞制備的人乳鐵蛋白及其制備方法無效
| 申請號： | 00810913.3 | 申請日： | 2000-07-26 |
| 公開（公告）號： | CN1365390A | 公開（公告）日： | 2002-08-21 |
| 發明（設計）人： | 李運萬;常云喜;郭常喜 | 申請（專利權）人： | 數位生物技術株式會社;韓晟化學株式會社 |
| 主分類號： | C12N15/12 | 分類號： | C12N15/12 |
| 代理公司： | 隆天國際專利商標代理有限公司 | 代理人： | 黃韌敏,楊淑媛 |
| 地址： | 韓國*** | 國省代碼： | 暫無信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 使用 昆蟲 細胞 制備 鐵蛋白 及其 方法 | ||
1.一種通過使用昆蟲細胞來制備人乳鐵蛋白的方法，包括下列步驟：
(a)將轉移載體(1)和重組質粒phLf-8(2)結合以制備重組表達載體pBacLf(3)，該重組表達載體用載體pBacPAK中的多角體蛋白啟動子修飾以實現對乳鐵蛋白基因的調節；
(b)在培養基中將所述重組表達載體與一幫助載體pBacPAK6(4)共轉染進入昆蟲細胞Sf9(5)以制備重組昆蟲細胞Sf-Lf(6)，并從所述重組昆蟲細胞中制備重組昆蟲病毒；以及
(c)從所述重組昆蟲細胞Sf-Lf(6)中制備人乳鐵蛋白。
2.如權利要求1所述的方法，其中所述制備重組昆蟲病毒的步驟還包括將步驟(b)培養的含有重組昆蟲細胞的培養基進行離心分離的步驟，該培養基包含步驟(b)中培養的重組昆蟲細胞，以從包含于最上層的昆蟲細胞中得到子代病毒。
3.一種通過包括下述步驟的方法制備的人乳鐵蛋白：
(a)將轉移載體(1)和重組質粒phLf-8(2)結合以制備重組表達載體pBacLf(3)，該重組表達載體用載體pBacPAK中的多角體蛋白啟動子修飾以實現對乳鐵蛋白基因的調節；
(b)在培養基中將所述重組表達載體與一幫助載體pBacPAK6(4)共轉染進入昆蟲細胞Sf9(5)以制備重組昆蟲細胞Sf-Lf(6)，并從所述重組昆蟲細胞中制備重組昆蟲病毒；以及
(d)從所述重組昆蟲細胞Sf-Lf(6)中制備人乳鐵蛋白。
4.通過包括如下步驟的方法制備的重組昆蟲病毒：
(a)將轉移載體(1)和重組質粒phLf-8(2)結合以制備重組表達載體pBacLf(3)，該重組表達載體用載體pBacPAK中的多角體蛋白啟動子修飾以實現對乳鐵蛋白基因的調節；
(b)在培養基中將所述重組表達載體與一幫助載體pBacPAK6(4)共轉染進入昆蟲細胞Sf9(5)以制備重組昆蟲細胞Sf-Lf(6)，并從所述重組昆蟲細胞中制備重組昆蟲病毒；以及
(e)從所述重組昆蟲細胞Sf-Lf(6)中制備人乳鐵蛋白。
5.用于重組人乳鐵蛋白的生物學檢測方法，包括下述步驟：
將通過權利要求1所述的方法制備的人乳鐵蛋白產物與病原性微生物混合；以及
檢測所述混合物抑制病原性微生物的抗菌活性。
6.如權利要求5所述的方法，其中所述的病原性微生物選自洋蔥假單胞菌、惡臭假單胞菌、鼠傷寒沙門氏菌、熒光假單胞菌和大腸桿菌。
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