[發(fā)明專利]反轉錄酶分析試劑盒及其使用以及用于在生物樣品中進行RT活性分析的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 00809387.3
• 申請日: 2000-06-16
• 公開（公告）號: CN1358232A
• 公開（公告）日: 2002-07-10
• 發(fā)明（設計）人: C·凱蘭德;S·格羅諾維茨;I·彼得松
• 申請（專利權）人: 卡維迪技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司
• 代理人: 羅宏,鐘守期

本發(fā)明涉及到一種反轉錄酶(RT)分析試劑盒，該試劑盒用于在生物樣品中進行RT活性分析。本發(fā)明還涉及到一種方法以及該RT試劑盒在生物樣品中進行RT定性和定量分析中的應用，可根據(jù)情況在該分析之后進行與紊亂或疾病相關的RT活性狀況的評估，該評估可根據(jù)該RT活性分析的結果進行。

發(fā)明背景

在包括人類免疫缺陷病毒(HIV)在內(nèi)的所有反轉錄病毒中，對于其進行的從病毒RNA合成DNA，反轉錄酶(RT)是一種關鍵性的酶(Baltimore-70，Temin-70，Barre-Sinoussi?et?al-83)。這一過程涉及到三種酶活性：第一條DNA鏈的合成，DNA/RNA雜合體中的病毒RNA的降解以及第二條鏈的合成(綜述見Goff)。

反轉錄病毒可以以外生和內(nèi)生形式存在。其主要的區(qū)別在于內(nèi)生的反轉錄病毒已經(jīng)進入了胚系并且由此而存在于該生物體的所有的細胞中，與之相比，外生的反轉錄病毒只能進入具有該特定病毒的適當受體的細胞。人類中的內(nèi)生反轉錄病毒(ERVs)被稱為HERVs。內(nèi)生反轉錄病毒的整合前病毒形式具有同外生反轉錄病毒相同的基本結構。一些HERVs向胚系中的整合被認為在3.5到4.5千萬年以前便已經(jīng)發(fā)生。因此，它們存在于所有的人類細胞中并且按照普通孟德爾定律進行遺傳。這些反轉錄病毒序列占哺乳動物基因組的1％并因此也占人類基因組的1％。

許多HERVs家族存在于人類基因組中。對于不同的家族，HERVs的每單倍體基因組拷貝數(shù)從單拷貝到成千個拷貝不等。最高的核苷酸序列保守性在pol基因中被發(fā)現(xiàn)。這一特征被用于推斷HERV家族間的親緣關系。盡管許多HERVs及它們的ORFs是缺陷型的，在多個組織類型的多數(shù)HERV家族中已經(jīng)檢測到mRNA轉錄本(綜述見Wilkinson?et?al.1994，leib-Msch?and?Seifarth?1996)。另外，在普通的人類胎盤、卵母細胞、teratacarcinomas、乳腺腫瘤組織以及在一些自體免疫患者的唾液腺中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了具有聚合酶和蛋白酶的病毒粒子(綜述見Wilkinson?et?al.1994，Urnovitz?and?Murphy?1996，Tnjes?et?al.，1997)。諸如缺氧和紫外照射這樣的逆境(stress)條件可能也會誘導HERVs的表達，該表達同在感染性反轉錄病毒的觀察一致(綜述見Duvic1995)。

一些HERVs已被定位于基因組內(nèi)的染色體斷點(Di?Cristofano?etal.1995，Meese?et?al.1996)。位于不同的染色體位點的HERV序列間的重組可能導致基因組重排列，該重排列包括轉位、反轉、重復和刪除。這樣的重組事件引起了基因組的不穩(wěn)定，該不穩(wěn)定性是進化的重要特征。另外，許多腫瘤的特征也在于特定的基因組重排，該重排被認為在腫瘤發(fā)生中起著關鍵作用。感染性反轉錄病毒的存在和腫瘤在宿主中的發(fā)展之間的關系提示HERVs與癌癥有聯(lián)系。在缺乏感染性病毒的情況下在原發(fā)性腫瘤樣品也經(jīng)常可以觀察到毒粒顆粒和反轉錄病毒相關抗原(Weiss?1984，F(xiàn)aff?e?al.1992)。另外，在患有癌癥的患者體內(nèi)經(jīng)顯示具有針對反轉錄病毒蛋白的抗體(Weiss?1984)。進一步，HERV序列被發(fā)現(xiàn)在特定的腫瘤衍生細胞系中高效表達(綜述見Lwer?et?al.1996)。

內(nèi)生前病毒還可以同外生變體進行重組(Martinelli?et?al.1990)。新的重組體獲得一種新的表型。這可能促成新感染性反轉錄病毒的進化。由于其它部分的突變可能是有害的并與顆粒的形成不相容，主要受影響的為env基因。一些反轉錄株系被發(fā)現(xiàn)在一個物種中是共生的并且在另一個物種中是病原體。這些發(fā)現(xiàn)顯示出異源移植的一個嚴重問題。被移植組織提供的共生ERVs在新的宿主中可能是病原性的。它們可能同反轉錄病毒融合所需的細胞表面受體相互作用，該受體存在于新宿主的細胞表面。另外還可能同該組織受體的基因組中的內(nèi)生反轉錄病毒發(fā)生重組并且創(chuàng)造出新的感染性反轉錄病毒，該病毒可能在種群中傳播。內(nèi)生和外生的反轉錄病毒均可促成遺傳材料在種間的橫向和垂直傳播并且為新病原物質(zhì)的進化提供機制。