[發(fā)明專利]反轉(zhuǎn)錄酶分析試劑盒及其使用以及用于在生物樣品中進行RT活性分析的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 00809387.3
• 申請日: 2000-06-16
• 公開（公告）號: CN1358232A
• 公開（公告）日: 2002-07-10
• 發(fā)明（設(shè)計）人: C·凱蘭德;S·格羅諾維茨;I·彼得松
• 申請（專利權(quán)）人: 卡維迪技術(shù)有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司
• 代理人: 羅宏,鐘守期

1.反轉(zhuǎn)錄酶(RT)分析試劑盒，該試劑盒含有一個或者幾個包裝，這些包裝固相結(jié)合的多聚核糖腺苷酸(prA)和/或多聚脫氧腺苷酸(pdA)模板，該模板通過使一種基于聚苯乙烯的固相同一種含有1-甲基咪唑的偶聯(lián)溶液以及prA和/或pdA相接觸并隨后進行溫育、以洗滌緩沖液進行洗滌、干燥和包裝來獲得，該試劑盒還含有對RT類型進行適配的分隔包裝的分析組分，這些組分選自由緩沖液，二價金屬離子、螯合劑、多胺、RNA酶抑制劑、還原試劑、鹽、穩(wěn)定化試劑和去污劑單獨組分或其混合物，以及凍干的脫氧核苷酸三磷酸、引物、保護試劑和濃縮的洗滌緩沖液單獨組分或其混合物，根據(jù)情況還含有凍干的參照酶和一種檢測系統(tǒng)的組分，該檢測系統(tǒng)含有凍干的偶聯(lián)有堿性磷酸酶的抗BrdU單克隆抗體、堿性磷酸酶底物緩沖液以及堿性磷酸酶底物組成的組，以及

該試劑盒的書面使用說明書。

2.權(quán)利要求1的RT分析試劑盒，其中該固相為一種微滴定板并且向各孔內(nèi)加入了一份偶聯(lián)溶液，該溶液含有100mM?1-甲基咪唑，以及0.5-2mg/ml?prA和/或pdA，隨后在10-60℃下溫育0.5-10小時，以洗滌緩沖液洗滌各孔以除去1-甲基咪唑并且干燥并包裝該平板，該洗滌緩沖液含有Bis-Tris丙烷，

3.權(quán)利要求2的RT分析試劑盒，其中向各孔內(nèi)加入了100μl偶聯(lián)溶液，該溶液含有100mM?1-甲基咪唑，以及1mg/ml?prA和/或pdA，隨后在室溫下溫育2小時，以2×300μl洗滌緩沖液洗滌各孔并且在37℃下干燥該平板25分鐘并在箔中包裝該平板并且進行真空密封包裝，該洗滌緩沖液含有10mM?Bis-Tris丙烷，

4.權(quán)利要求1-3其中之一的RT分析試劑盒，其中該分析組分選自該分析組分選自由Tris和Hepes緩沖液，、二價金屬離子Mg²⁺和Mn²⁺，螯合劑乙二胺四乙酸(EDTA)和乙二醇雙(β-氨基乙醚)N，N，N’，N’-四乙酸(EGTA)以及多胺，精胺和亞精胺、RNA酶抑制劑硫酸肝素和硫酸葡聚糖、還原試劑二硫蘇糖醇(DTT)和二硫赤蘚醇(DTE)，谷胱甘肽、鹽NaCl和KCl、穩(wěn)定化試劑新生小牛血清(NCS)和牛血清白蛋白(BSA)、去污劑吐溫-20和Triton?X-100、脫氧核苷酸三磷酸BrdUTP、引物寡聚dT，以及保護性試劑ATP、GTP和CTP組成的群體。

5.權(quán)利要求1-4其中之一的RT分析試劑盒對于在生物樣品中的定性和定量分析的應(yīng)用。

6.權(quán)利要求5的應(yīng)用，其中該生物樣品選自生物液體或細胞抽提物。

7.權(quán)利要求6的應(yīng)用，其中該生物液體選自由血漿、血清、脊髓液、滑膜液和胸膜液組成的群體。

8.權(quán)利要求5-7其中之一的應(yīng)用，在該應(yīng)用之后根據(jù)該RT活性的分析結(jié)果進行了對與紊亂或疾病相關(guān)的RT活性水平的評估。

9.在生物樣品中進行RT活性的定性和定量分析的方法，該方法包括的步驟有使用和遵循權(quán)利要求1-4其中之一的RT分析試劑盒的書面說明書來進行在生物樣品中的RT活性檢測。

10.權(quán)利要求9的方法，其中該生物樣品選自生物液體或細胞抽提物。

11.權(quán)利要求10的方法，其中該生物液體選自由血漿、血清、脊髓液、滑膜液和胸膜液組成的群體。

12.權(quán)利要求9-11其中之一的方法，在該方法之后根據(jù)該RT活性的分析結(jié)果進行了對與紊亂或疾病相關(guān)的RT活性水平的評估。