[發(fā)明專利]用氣單胞菌氨肽酶由多肽除去N末端丙氨酸殘基的方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 00808282.0
• 申請(qǐng)日: 2000-04-26
• 公開（公告）號(hào): CN1353755A
• 公開（公告）日: 2002-06-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: J·S·陶;D·W·泰勒
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 法瑪西雅公司
• 主分類號(hào): C12N15/18
• 分類號(hào): C12N15/18;C12P21/06;C07K14/575;C07K14/18;//C12N9/48
• 代理公司: 中國國際貿(mào)易促進(jìn)委員會(huì)專利商標(biāo)事務(wù)所
• 代理人: 唐偉杰

1.由重組蛋白質(zhì)除去N末端丙氨酰基的方法，包括使所述重組蛋白質(zhì)接觸氣單胞菌氨肽酶從而除去N末端丙氨酰基，并回收產(chǎn)生的重組蛋白質(zhì)。

2.權(quán)利要求1的方法，其中所述重組蛋白質(zhì)是真核起源的。

3.權(quán)利要求2的方法，其中所述重組蛋白質(zhì)選自下組：人生長激素(hGH)、牛生長激素(bST)、豬生長激素(pST)、和人組織因子途徑抑制劑(TFPI)。

4.權(quán)利要求1的方法，其中所述接觸步驟是在大約pH7-大約pH11之間的pH進(jìn)行的。

5.權(quán)利要求4的方法，其中所述接觸步驟是在大約pH8-大約pH10之間的pH進(jìn)行的。

6.權(quán)利要求5的方法，其中所述接觸步驟是在大約pH8.0-大約pH9.5之間的pH進(jìn)行的。

7.權(quán)利要求1的方法，其中所述接觸步驟是在選自下組的緩沖液中進(jìn)行的：硼酸鹽、CHES、碳酸氫鈉、磷酸鈉、和Tris-HCl。

8.權(quán)利要求7的方法，其中所述緩沖液是硼酸鹽。

9.權(quán)利要求7的方法，其中所述緩沖液是磷酸鈉。

10.權(quán)利要求7的方法，其中所述緩沖液是Tris-HCl。

11.權(quán)利要求1的方法，其中所述氨肽酶是固定化的。

12.權(quán)利要求11的方法，其中所述氨肽酶固定在層析樹脂、層析表面、或?qū)游瞿z上。

13.權(quán)利要求12的方法，其中所述重組蛋白質(zhì)流經(jīng)裝有固定了氨肽酶的層析樹脂的層析柱。

14.權(quán)利要求1的方法，其中所述氨肽酶是未固定的(在自由的溶液中進(jìn)行)。

15.由權(quán)利要求1的方法制備的不含N末端丙氨酸的重組蛋白質(zhì)。

16.使用氣單胞菌氨肽酶，由通式為X-Y-Pro-Z的多肽前體除去氨基末端氨基酸，從而產(chǎn)生通式為Y-Pro-Z的多肽的方法，其中X是除脯氨酸外的一個(gè)或更多氨基酸，Y是除脯氨酸外的任意氨基酸，Z是一個(gè)或多個(gè)氨基酸。

17.權(quán)利要求16的方法，其中X是丙氨酸。

18.權(quán)利要求16的方法，其中Y是選自下組的氨基酸：苯丙氨酸、甲硫氨酸、蘇氨酸、和天冬氨酸。

19.權(quán)利要求18的方法，其中Y是苯丙氨酸。

20.權(quán)利要求16的方法，其中X是丙氨酸且Y是苯丙氨酸。

21.權(quán)利要求19或20的方法，其中多肽前體是Ala-hGH。