[發明專利]用氣單胞菌氨肽酶由多肽除去N末端丙氨酸殘基的方法

無效

• 申請號: 00808282.0
• 申請日: 2000-04-26
• 公開（公告）號: CN1353755A
• 公開（公告）日: 2002-06-12
• 發明（設計）人: J·S·陶;D·W·泰勒
• 申請（專利權）人: 法瑪西雅公司
• 主分類號: C12N15/18
• 分類號: C12N15/18;C12P21/06;C07K14/575;C07K14/18;//C12N9/48
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所
• 代理人: 唐偉杰

1.由重組蛋白質除去N末端丙氨酰基的方法，包括使所述重組蛋白質接觸氣單胞菌氨肽酶從而除去N末端丙氨酰基，并回收產生的重組蛋白質。

2.權利要求1的方法，其中所述重組蛋白質是真核起源的。

3.權利要求2的方法，其中所述重組蛋白質選自下組：人生長激素(hGH)、牛生長激素(bST)、豬生長激素(pST)、和人組織因子途徑抑制劑(TFPI)。

4.權利要求1的方法，其中所述接觸步驟是在大約pH7-大約pH11之間的pH進行的。

5.權利要求4的方法，其中所述接觸步驟是在大約pH8-大約pH10之間的pH進行的。

6.權利要求5的方法，其中所述接觸步驟是在大約pH8.0-大約pH9.5之間的pH進行的。

7.權利要求1的方法，其中所述接觸步驟是在選自下組的緩沖液中進行的：硼酸鹽、CHES、碳酸氫鈉、磷酸鈉、和Tris-HCl。

8.權利要求7的方法，其中所述緩沖液是硼酸鹽。

9.權利要求7的方法，其中所述緩沖液是磷酸鈉。

10.權利要求7的方法，其中所述緩沖液是Tris-HCl。

11.權利要求1的方法，其中所述氨肽酶是固定化的。

12.權利要求11的方法，其中所述氨肽酶固定在層析樹脂、層析表面、或層析凝膠上。

13.權利要求12的方法，其中所述重組蛋白質流經裝有固定了氨肽酶的層析樹脂的層析柱。

14.權利要求1的方法，其中所述氨肽酶是未固定的(在自由的溶液中進行)。

15.由權利要求1的方法制備的不含N末端丙氨酸的重組蛋白質。

16.使用氣單胞菌氨肽酶，由通式為X-Y-Pro-Z的多肽前體除去氨基末端氨基酸，從而產生通式為Y-Pro-Z的多肽的方法，其中X是除脯氨酸外的一個或更多氨基酸，Y是除脯氨酸外的任意氨基酸，Z是一個或多個氨基酸。

17.權利要求16的方法，其中X是丙氨酸。

18.權利要求16的方法，其中Y是選自下組的氨基酸：苯丙氨酸、甲硫氨酸、蘇氨酸、和天冬氨酸。

19.權利要求18的方法，其中Y是苯丙氨酸。

20.權利要求16的方法，其中X是丙氨酸且Y是苯丙氨酸。

21.權利要求19或20的方法，其中多肽前體是Ala-hGH。