[發(fā)明專利]L－氨基酸生產(chǎn)菌以及用于生產(chǎn)L－氨基酸的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 00806019.3
• 申請日: 2000-04-07
• 公開（公告）號: CN1346402A
• 公開（公告）日: 2002-04-24
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 郡司義哉;安枝壽;杉本慎一;辻本信晴;島岡惠;宮田由理;大場麻奈美
• 申請（專利權(quán)）人: 味之素株式會社
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N1/32;C12N9/00;C12N15/52;C12P13/04
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司
• 代理人: 劉玥

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及微生物工業(yè)領(lǐng)域技術(shù)。具體來說，本發(fā)明涉及通過發(fā)酵生產(chǎn)L-氨基酸的方法以及在該方法中使用的微生物。

背景技術(shù)

在工業(yè)上采用短桿菌屬(Brevibacterium)、棒桿菌屬(Corynebacterium)、芽胞桿菌屬(Bacillus)、埃希氏菌屬(Escherichia)、鏈霉菌屬(Streptomyces)、假單胞菌屬(Pseudomonas)、節(jié)桿菌屬(Arthrobacter)、沙雷氏菌屬(Serratia)、青霉屬(Penicillium)、念珠菌屬(Candida)等微生物發(fā)酵生產(chǎn)氨基酸，例如L-賴氨酸、L-谷氨酸、L-蘇氨酸、L-亮氨酸、L-異亮氨酸、L-纈氨酸和L-苯丙氨酸。為了提高生產(chǎn)率，使用分離自大自然的菌株或其人工突變體用作這樣的工業(yè)微生物。已經(jīng)公開了各種通過利用重組DNA技術(shù)增強L-谷氨酸生物合成酶的活性的技術(shù)，以提高L-谷氨酸的生產(chǎn)能力。

通過培育微生物例如上述微生物以及改進生產(chǎn)方法已經(jīng)顯著提高了L-氨基酸的生產(chǎn)能力。但是，為了進一步達到未來更高的要求，仍然需要開發(fā)以更低成本更有效生產(chǎn)L-氨基酸的方法。

關(guān)于通過發(fā)酵中醇(可以低成本大量獲得的發(fā)酵原料)生產(chǎn)氨基酸的方法，常規(guī)已知方法采用以下微生物：無色桿菌屬(Achromobacter)或假單胞菌屬(Pseudomonas)(日本專利公布(Kokoku)號45-25273/1970)、精朊桿菌屬(Protaminobacter)(日本專利申請公開(Kokai)號49-125590/1974)、精朊桿菌屬或甲烷單毛桿菌屬(Methanomonas)(日本專利申請公開(Kokai)號50-25790/1975)、微環(huán)菌屬(Microcyclus)(日本專利申請公開(Kokai)號52-18886/1977)、甲基菌屬(Methylobacillus)(日本專利申請公開(Kokai)號4-91793/1992)、芽胞桿菌屬(日本專利申請公開(Kokai)號3-505284/1991)等。

然而，迄今為止已知沒有利用嗜甲基菌屬細菌(Methylophilusbacteria)生產(chǎn)L-氨基酸的方法。盡管已知EP?0?035?831?A、EP?0?037?273A和EP?0?066?994?A描述的方法為利用重組DNA轉(zhuǎn)化嗜甲基菌屬細菌的方法，但是利用重組DNA技術(shù)改進嗜甲基菌屬細菌的氨基酸生產(chǎn)能力仍然不為人們所了解。

發(fā)明公開

本發(fā)明的目的是提供新型L-氨基酸生產(chǎn)菌和利用所述L-氨基酸生產(chǎn)菌生產(chǎn)L-氨基酸的方法。

本發(fā)明人致力于實現(xiàn)上述目的，結(jié)果發(fā)現(xiàn)嗜甲基菌屬(Methylophilus)細菌適用于生產(chǎn)L-氨基酸。而且，盡管通常認為獲得嗜甲基菌屬細菌的營養(yǎng)缺陷型突變體是困難的(FEMS?Microbiology?Rev.39，235-258(1986)和Antonie?van?Leeuwenhoek?53，47-53(1987))，但是本發(fā)明人成功獲得了所述細菌的營養(yǎng)缺陷型突變體。因此完成了本發(fā)明。

也就是說，本發(fā)明提供以下細菌：

(1)一種具有L-氨基酸生產(chǎn)能力的嗜甲基菌屬細菌。

(2)按照(1)的嗜甲基菌屬細菌，其中所述L-氨基酸是L-賴氨酸、L-纈氨酸、L-亮氨酸、L-異亮氨酸或L-蘇氨酸。

(3)按照(1)的嗜甲基菌屬細菌，它可耐受L-氨基酸類似物或L-氨基酸輔源營養(yǎng)(auxotrophy)。

(4)按照(1)的嗜甲基菌屬細菌，其中L-氨基酸生物合成酶活性提高。

(5)按照(1)的嗜甲基菌屬細菌，其中二氫吡啶二羧酸鹽合酶活性和天冬氨酸激酶活性提高，而且所述細菌具有L-賴氨酸生產(chǎn)能力。

(6)按照(1)的嗜甲基菌屬細菌，其中二氫吡啶二羧酸鹽合酶活性提高，而且所述細菌具有L-賴氨酸生產(chǎn)能力。

(7)按照(1)的嗜甲基菌屬細菌，其中天冬氨酸激酶活性提高，而且所述細菌具有L-賴氨酸生產(chǎn)能力。

(8)按照(5)-(7)任一項的嗜甲基菌屬細菌，其中選自天冬氨酸半醛脫氫酶、二氫吡啶二羧酸鹽還原酶和二氨基庚二酸鹽脫羧酶的一種、兩種或三種酶的一種或多種活性提高。

(9)按照(5)的嗜甲基菌屬細菌，其中所述二氫吡啶二羧酸鹽合酶活性和所述天冬氨酸激酶活性提高，因為編碼不影響L-賴氨酸的反饋抑制的二氫吡啶二羧酸鹽合酶的DNA和編碼不影響L-賴氨酸反饋抑制的天冬氨酸激酶的DNA通過導(dǎo)入轉(zhuǎn)化細胞。