[發(fā)明專利]鑒定N－末端前BNP的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 00803234.3
• 申請日: 2000-01-27
• 公開（公告）號: CN1339107A
• 公開（公告）日: 2002-03-06
• 發(fā)明（設(shè)計）人: J·卡爾;H·利爾;P·斯塔爾;K·克呂格爾;A·博格亞;A·加盧塞爾
• 申請（專利權(quán)）人: 羅赫診斷器材股份有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;C07K14/58;C07K16/26;C07K16/18;C12N15/06
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司
• 代理人: 羅宏,邰紅

本發(fā)明涉及到一種方法，該方法用于通過至少兩種抗體來鑒定樣品中的N-末端前BNP(N-terminalem?pro?BNP)，這些抗體檢測N-末端前BNP的不同表位。該方法用于對健康個體和NYHA?I至IV級患者的樣品進(jìn)行區(qū)分或歸類。本發(fā)明進(jìn)一步涉及到重組N-末端前BNP，該N-末端前BNP作為標(biāo)準(zhǔn)在鑒定N-末端前BNP的方法中的應(yīng)用，用于檢測重組N-末端前BNP的抗體及它們的生產(chǎn)。

心力衰竭是一種廣泛的現(xiàn)象，特別是在西方世界中。根據(jù)羅氏(Roche)醫(yī)學(xué)字典(1993，Urban?&?Schwarzenberg)，心力衰竭是在進(jìn)行身體運動或甚至在靜息時心臟產(chǎn)生代謝所需的血流的能力或確保靜脈回流的能力的急性或慢性衰退(退行性或進(jìn)行性衰竭)。因此，該心臟的泵血功能是脆弱的。心力衰竭的起因十分復(fù)雜。除其它原因之外，本文提及心肌的炎癥和衰退變性，冠狀動脈灌注失調(diào)(coronaryperfusion?disorder)，冠狀動脈硬化和傷損。這導(dǎo)致了外周血流的變性，呼吸紊亂，腎功能紊亂和電解質(zhì)代謝失調(diào)(水腫)，并且導(dǎo)致骨骼肌系統(tǒng)性能降低。

根據(jù)紐約心臟聯(lián)合會(NYHA)，經(jīng)過在運動后的身體測試，心力衰竭被分為以下的NYHA級別：I指的是在正常身體運動后完全無痛苦，II指的是對體質(zhì)強(qiáng)度有較低的限制，III指的是對體質(zhì)強(qiáng)度有較強(qiáng)的限制，IV指的是隨著每一次身體活動機(jī)能不足的癥狀均有所增加，該機(jī)能不足的癥狀在靜息時多數(shù)時間仍存在。

對于通過糖苷、血管擴(kuò)張劑、ACE抑制劑和/或β-阻斷劑進(jìn)行的對心力衰竭的有效醫(yī)療，對心力衰竭的精確診斷和在可能的情況下根據(jù)嚴(yán)重程度進(jìn)行分類以及在治療期間進(jìn)行額外的監(jiān)測是最為必要的。

根據(jù)本領(lǐng)域的現(xiàn)狀，一些用于心力衰竭的血清標(biāo)記已經(jīng)過研討，例如ANP(N-末端心房利尿鈉肽激素)和前ANP，CNP(C-利尿鈉肽)，adrenomedulin，神經(jīng)肽Y，endotheline和BNP(腦利尿鈉肽)。ANP和前ANP一般適用于心力衰竭的診斷用標(biāo)記；但它們在血液中不穩(wěn)定或僅有短暫的半壽期，這對診斷測試是一個障礙(Clin.Sci.95(3)(1998)，235-239；Clenland?et?al.，Heart?75(1996)，410-413)。

BNP是一種經(jīng)常被引用并很有意義的標(biāo)記(腦利尿鈉肽)。BNP最初在豬腦中被鑒定。它是一種心臟激素，在結(jié)構(gòu)和功能上類似于ANP(心鈉素)(Sudoh?et?al.，Nature?332(1988)，78-81)。人類BNP由32個氨基酸組成，它主要由心室分泌并在人類血漿中進(jìn)行循環(huán)。已知的BNP作為診斷標(biāo)記的應(yīng)用的例子來自EP-A-0?542?255。BNP具有分子內(nèi)的二硫鍵并且作為一種分析物不很穩(wěn)定，這據(jù)估計是因為其作為必須被迅速破壞的激素的生理功能。因此，它作為一種診斷標(biāo)記的應(yīng)用僅僅是有限的(Masuta?et?al.，Clin.Chem.Vol.44?No.6?SupplementA(1998)，130；Tsuji?et?al.，Clin.Chem.40(1994)，672)。

BNP的前體分子，即前BNP，由108個氨基酸組成，該前體分子中的上述32個C-末端氨基酸被稱為BNP，它產(chǎn)生實際的激素效應(yīng)。從該前體中釋放的N-末端氨基酸1-76被稱為N-末端前BNP。除BNP(77-108)外N-末端前BNP以及進(jìn)一步裂解的產(chǎn)物(1-76)也在血漿中進(jìn)行循環(huán)(Hunt?et?al.，Biochem.Biophys.Res.Com.214(1995)，1175-1183)，這樣N-末端前BNP作為心力衰竭的標(biāo)記也是相關(guān)的。是否該前體分子前BNP也在血漿中存在并無確切的解答。然而據(jù)描述(Hunt?et?al.，Peptides，Vol.18，No.10(1997)，1475-1481)在血漿中可以檢測到較低量的前BNP(1-108)的釋放，但由于N-末端的迅速部分降解一些氨基酸是缺少的。在該文獻(xiàn)中該分子被稱為高分子量BNP。