[發(fā)明專利]使用不同的核苷酸混合物的DNA測序方法和用于該方法的試劑盒

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 00803086.3
• 申請日: 2000-11-25
• 公開（公告）號: CN1338004A
• 公開（公告）日: 2002-02-27
• 發(fā)明（設計）人: 樸韓浯;俞在亨
• 申請（專利權）人: 株式會社百尼爾
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 中原信達知識產權代理有限責任公司
• 代理人: 丁業(yè)平,王維玉

1.一種采用雙脫氧核苷酸介導的終止反應的DNA核苷酸序列分析方法，其特征在于包括：

1)制備下列反應混合物的步驟

其中包括ddGTP與dGTP的摩爾比高于0.05的核苷酸混合物的用于產生互補DNA片段的反應混合物；

其中包括ddATP與dATP的摩爾比高于0.058的核苷酸混合物的用于產生互補DNA片段的反應混合物；

其中包括ddTTP與dTTP的摩爾比高于0.1的核苷酸混合物的用于產生互補DNA片段的反應混合物；和

其中包括ddCTP與dCTP的摩爾比高于0.0033的核苷酸混合物的用于產生互補DNA片段的反應混合物；

2)制備下列反應混合物的步驟

其中包括ddGTP與dGTP的摩爾比低于0.02的核苷酸混合物的用于產生互補DNA片段的反應混合物；

其中包括ddATP與dATP的摩爾比低于0.02的核苷酸混合物的用于產生互補DNA片段的反應混合物；

其中包括ddTTP與dTTP的摩爾比低于0.02的核苷酸混合物的用于產生互補DNA片段的反應混合物；和

其中包括ddCTP與dCTP的摩爾比低于0.02的核苷酸混合物的用于產生互補DNA片段的反應混合物；

3)分別向以上步驟1)和2)中制備的上述8種反應混合物中添加模板DNA和引物來產生互補DNA片段的步驟；

4)將步驟3)中獲得的互補DNA片段按照ddNTP的種類分別進行混合并按分子量順序對如此制備的各互補DNA片段的混合物進行分離的步驟；

5)通過識別如上分離的所述互補DNA片段的末端堿基來確定模板DNA核苷酸序列的步驟。

2.根據權利要求1的DNA核苷酸序列分析方法，其中用于產生互補DNA片段的反應混合物是

其中包括ddGTP與dGTP的摩爾比不低于0.05的核苷酸混合物的反應混合物；

其中包括ddATP與dATP的摩爾比不低于0.116的核苷酸混合物的反應混合物；

其中包括ddTTP與dTTP的摩爾比不低于0.2的核苷酸混合物的反應混合物；

其中包括ddCTP與dCTP的摩爾比不低于0.066的核苷酸混合物的反應混合物；

其中包括ddGTP與dGTP的摩爾比不高于0.01的核苷酸混合物的反應混合物；

其中包括ddATP與dATP的摩爾比不高于0.0116的核苷酸混合物的反應混合物；

其中包括ddTTP與dTTP的摩爾比不高于0.015的核苷酸混合物的反應混合物；和

其中包括ddCTP與dCTP的摩爾比不高于0.0066的核苷酸混合物的反應混合物。

3.根據權利要求1的DNA核苷酸序列分析方法，其中用于產生互補DNA片段的反應混合物是

其中包括ddGTP與dGTP的摩爾比不低于0.15的核苷酸混合物的反應混合物；

其中包括ddATP與dATP的摩爾比不低于0.174的核苷酸混合物的反應混合物；

其中包括ddTTP與dTTP的摩爾比不低于0.3的核苷酸混合物的反應混合物；

其中包括ddCTP與dCTP的摩爾比不低于0.099的核苷酸混合物的反應混合物；

其中包括ddGTP與dGTP的摩爾比不高于0.005的核苷酸混合物的反應混合物；

其中包括ddATP與dATP的摩爾比不高于0.0058的核苷酸混合物的反應混合物；

其中包括ddTTP與dTTP的摩爾比不高于0.01的核苷酸混合物的反應混合物；和

其中包括ddCTP與dCTP的摩爾比不高于0.0033的核苷酸混合物的反應混合物。

4.根據權利要求1的DNA核苷酸序列分析方法，其中用于產生互補DNA片段的反應混合物還包括

其中包括ddGTP與dGTP的摩爾比為0.02-0.05的核苷酸混合物的反應混合物；

其中包括ddATP與dATP的摩爾比為0.02-0.058的核苷酸混合物的反應混合物；

其中包括ddTTP與dTTP的摩爾比為0.02-0.1的核苷酸混合物的反應混合物；

其中包括ddCTP與dCTP的摩爾比為0.02-0.033的核苷酸混合物的反應混合物。