[發明專利]采用多種DNA聚合酶的DNA測序方法和所用的試劑盒

無效

• 申請號: 00802714.5
• 申請日: 2000-11-25
• 公開（公告）號: CN1336960A
• 公開（公告）日: 2002-02-20
• 發明（設計）人: 樸韓浯;俞在亨
• 申請（專利權）人: 株式會社百尼爾
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 中原信達知識產權代理有限責任公司
• 代理人: 丁業平,王維玉

1.一種采用雙脫氧核苷酸介導的鏈終止反應的DNA核苷酸序列分析方法，其特征在于，包括：

(i)核苷酸混合物的制備步驟，該混合物同時包含對dNTP的親和力小于對ddNTP的親和力3000倍的DNA聚合酶和對dNTP的親和力高于對ddNTP的親和力3000倍的DNA聚合酶；

(ii)通過將模板DNA連同引物一起加入所述核苷酸混合物中生成DNA片段的步驟；和

(iii)識別按照分子量順序分離的所述DNA片段的末端堿基以測定模板DNA的核苷酸序列的步驟。

2.根據權利要求1的DNA核苷酸序列分析方法，其中核苷酸混合物同時包含對dNTP的親和力不超過對ddNTP的親和力1000倍的DNA聚合酶和對dNTP的親和力不小于對ddNTP的親和力5000倍的DNA聚合酶。

3.根據權利要求1的DNA核苷酸序列分析方法，其中核苷酸混合物同時包含對dNTP的親和力不超過對ddNTP的親和力0.5倍的DNA聚合酶和對dNTP的親和力不小于對ddNTP的親和力8000倍的DNA聚合酶。

4.根據權利要求1的DNA核苷酸序列分析方法，其中核苷酸混合物還包含對dNTP的親和力是對ddNTP的親和力3000倍的DNA聚合酶。

5.根據權利要求2的DNA核苷酸序列分析方法，其中核苷酸混合物還包含對dNTP的親和力是對ddNTP的親和力1000-5000倍的DNA聚合酶。

6.根據權利要求3的DNA核苷酸序列分析方法，其中核苷酸混合物還包含對dNTP的親和力是對ddNTP的親和力0.5-8000倍的DNA聚合酶。

7.根據權利要求1的DNA核苷酸序列分析方法，其中將DNA片段通過電泳按照其分子量順序進行分離。

8.根據權利要求1的DNA核苷酸序列分析方法，其中每個DNA片段的末端堿基通過銀染色法進行識別。

9.根據權利要求2的DNA核苷酸序列分析方法，其中將DNA片段通過電泳按照其分子量順序進行分離。

10.根據權利要求2的DNA核苷酸序列分析方法，其中每個DNA片段的末端堿基通過銀染色法進行識別。

11.根據權利要求3的DNA核苷酸序列分析方法，其中將DNA片段通過電泳按照其分子量順序進行分離。

12.根據權利要求3的DNA核苷酸序列分析方法，其中每個DNA片段的末端堿基通過銀染色法進行識別。

13.根據權利要求4的DNA核苷酸序列分析方法，其中將DNA片段通過電泳按照其分子量順序進行分離。

14.根據權利要求4的DNA核苷酸序列分析方法，其中每個DNA片段的末端堿基通過銀染色法進行識別。

15.根據權利要求5的DNA核苷酸序列分析方法，其中將DNA片段通過電泳按照其分子量順序進行分離。

16.根據權利要求5的DNA核苷酸序列分析方法，其中每個DNA片段的末端堿基通過銀染色法進行識別。

17.根據權利要求6的DNA核苷酸序列分析方法，其中將DNA片段通過電泳按照其分子量順序分離。

18.根據權利要求6的DNA核苷酸序列分析方法，其中每個DNA片段的末端堿基通過銀染色法進行識別。

19.一種DNA核苷酸測序試劑盒，包括一裝有反應緩沖液、穩定劑、dATP、dGTP、dCTP、dTTP、ddATP和DNA聚合酶的氣密性容器，一裝有反應緩沖液、穩定劑、dATP、dGTP、dCTP、dTTP、ddGTP和DNA聚合酶的氣密性容器，一裝有反應緩沖液、穩定劑、dATP、dGTP、dCTP、dTTP、ddCTP和DNA聚合酶的氣密性容器，和一裝有反應緩沖液、穩定劑、dATP、dGTP、dCTP、dTTP、ddTTP和DNA聚合酶的氣密性容器；其特征在于，所述DNA聚合酶是對dNTP的親和力小于對ddNTP的親和力3000倍的DNA聚合酶和對dNTP的親和力高于對ddNTP的親和力3000倍的DNA聚合酶的混合物。