[發(fā)明專利]幽門螺桿菌fcagA基因表達(dá)工程菌的構(gòu)建及其產(chǎn)物的制備方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 00135459.0
• 申請(qǐng)日: 2000-12-15
• 公開（公告）號(hào): CN1358860A
• 公開（公告）日: 2002-07-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 韓鋒產(chǎn);閻小君
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 西安高科實(shí)業(yè)股份有限公司基因生命科技分公司
• 主分類號(hào): C12N15/31
• 分類號(hào): C12N15/31;C12N15/63;C12N15/70;A61K39/02;//;C12R101)
• 代理公司: 西安新思維專利事務(wù)所有限公司
• 代理人: 李罡

1、一種幽門螺桿菌fcagA基因表達(dá)工程菌的構(gòu)建，其特征在于：選取幽門螺桿菌的DNA中的fcagA基因，其核苷酸序列如下：

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atttttctaa?attcactctt?ggcgatatgg?aaatgttaga?tgttgagggc?gtcgccgaca

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2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的幽門螺桿菌fcagA基因表達(dá)工程菌的構(gòu)建，其特征在于：

1)從幽門螺桿菌中提取總DNA；

2)用PCR方法從基因組DNA中擴(kuò)增fcagA基因；

3)將fcagA基因連接在表達(dá)質(zhì)粒pBV220上；

4)將重組表達(dá)質(zhì)粒fcagA/pBV220轉(zhuǎn)化入大腸桿菌DH5α中，培養(yǎng)獲得工

??程菌。

3、根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的幽門螺桿菌fcagA基因表達(dá)工程菌的構(gòu)建，其特征于：上述用PCR方法從基因組DNA中擴(kuò)增fcagA基因，其設(shè)計(jì)PCR引物，序列如下：

cagAp1：5’-tcggaattcatgactaacgaaactattgacc-3’

cagAp2：5’-cagggatccatgtcggcgacgccctcaacat-3’

用于擴(kuò)增cagA基因5′一端854bp的片段。

4、根據(jù)權(quán)利要求3所述的幽門螺桿菌fcagA基因表達(dá)工程菌的構(gòu)建，其特征在于：上述fcagA基因與表達(dá)質(zhì)粒pBV220的連接如下：

1)PCR所采用二個(gè)引物是根據(jù)與表達(dá)質(zhì)粒中EcoRI和BamH?I的酶切點(diǎn)相匹配而設(shè)計(jì)的，并在EcoR?I點(diǎn)位后設(shè)置起始密碼；

2)fcagA基因5′端連在表達(dá)質(zhì)粒EcoR?I位點(diǎn)上，3′端連在BamHI位點(diǎn)上，從而構(gòu)成重組表達(dá)質(zhì)粒fcagA/pBV220。

5、一種幽門螺桿菌fcagA基因表達(dá)工程菌的表達(dá)產(chǎn)物的制備方法：

1)FcagA蛋白的溫控誘導(dǎo)及表達(dá)；

2)FCagA蛋白的分離及純化；

3)FCagA蛋白抗原性鑒定。