[發明專利]編碼zwal基因的新核苷酸序列

無效

• 申請號: 00134034.4
• 申請日: 2000-12-07
• 公開（公告）號: CN1304998A
• 公開（公告）日: 2001-07-25
• 發明（設計）人: 貝蒂娜·默克爾;瓦爾特·普費弗勒;阿希姆·馬克思;約恩·卡利諾夫斯基;布里吉特·巴特;阿爾弗雷德·普爾勒
• 申請（專利權）人: 德古薩－于爾斯股份公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10;C12N15/11;C12N15/31;C12N15/52;C12N15/63;C12N15/64;C12P13/04;C12Q1/68;//;C12R115)
• 代理公司: 永新專利商標代理有限公司
• 代理人: 林曉紅

1、包括選自以下一組多核苷酸序列的分離的多核苷酸：

a)與編碼包括SEQ?ID?NO:2的氨基酸序列的多肽的多核苷酸至少70％相同的多核苷酸，

b)編碼包括與SEQ?ID?NO:2的氨基酸序列至少70％相同的氨基酸序列的多肽的多核苷酸，

c)互補于a)或b)的多核苷酸序列的多核苷酸，及

d)包括a)、b)或c)的多核苷酸序列的至少15個連續核苷酸的多核苷酸。

2、如權利要求1的多核苷酸，其中該多核苷酸是在棒狀細菌中能復制的優選重組的DNA。

3、如權利要求1的多核苷酸，其中該多核苷酸是RNA。

4、如權利要求1的多核苷酸，包括SEQ?ID?NO:1所示核酸序列。

5、權利要求2能復制的DNA，包括：

(ⅰ)SEQ?ID?NO.1所示的核苷酸序列，或

(ⅱ)在遺傳密碼簡并范圍內相應于(ⅰ)序列的至少一個序列，或

(ⅲ)與互補于(ⅰ)或(ⅱ)序列的序列雜交的至少一個序列，和任選地

(ⅳ)(ⅰ)中有功能的中性有義突變。

6、含有權利要求1的多核苷酸的載體，尤其pCR2.1zwa1exp，其特征在于具有如圖1所示限制圖譜，保藏在E.coli中，保藏號DSM11315。

7、作為宿主細胞的棒狀細菌，其含有權利要求6的載體或其中zwa1基因是擴增的。

8、制備L-氨基酸，尤其L-賴氨酸的方法，特征在于進行以下步驟：

a)發酵所需的生產L-氨基酸的細菌，該細菌中至少zwa1基因是擴增的，

b)濃縮培養基或細菌細胞中的所需產物，并

c)分離L-氨基酸。

9、權利要求8的方法，特征在于所用的細菌中所需L-氨基酸的生物合成途徑的其它基因被額外擴增。

10、權利要求8的方法，特征在于所用的細菌中，降低L-賴氨酸生成的代謝途徑至少被部分關閉。

11、權利要求8-12任一項的方法，特征在于使用產生L-賴氨酸的棒狀細菌。

12、權利要求8的方法，特征在于為制備L-賴氨酸，發酵如下的細菌，該細菌中一或多個選自以下一組的基因是同時擴增的，尤其是過表達的：

12.1編碼二氫-2,6-吡啶二羧酸合酶的dapA基因，

12.2編碼反饋抗性天冬氨酸激酶的lysC基因，

12.3編碼四-二氫-2,6-吡啶二羧酸琥珀酰化酶的dapD基因，

12.4編碼琥珀酰二氨基庚二酸脫琥珀酰化酶的dapE基因，

12.5編碼甘油醛-3-磷酸脫氫酶的gap基因，

12.6編碼丙酮酸羧化酶的pyc基因，

12.7編碼蘋果酸：醌氧化還原酶的mqo基因，

12.8編碼賴氨酸輸出蛋白的lysE基因。

13、權利要求8的方法，特征在于為制備L-賴氨酸，發酵如下的細菌，該細菌中，選自以下一組的一或多個基因是同時弱化的：

13.1編碼烯醇丙酮酸磷酸羧激酶的pck基因

13.2編碼葡糖-6-磷酸異構酶的pgi基因。

14、前述一或多條權利要求的方法，特征在于應用谷氨酸棒桿菌的微生物。

15、權利要求1的多核苷酸序列或其部分作為雜交探針以分離編碼Zwa1基因產物的cDNA的應用。

16、權利要求1的多核苷酸序列或其部分作為雜交探針以分離與zwa1基因序列高度相似的cDNA或基因的應用。