[發明專利]用疫苗預防水痘的方法

無效

• 申請號: 00133104.3
• 申請日: 1993-06-03
• 公開（公告）號: CN1307902A
• 公開（公告）日: 2001-08-15
• 發明（設計）人: P·J·普羅沃斯特;D·L·克拉;P·A·弗里曼
• 申請（專利權）人: 麥克公司
• 主分類號: A61K39/25
• 分類號: A61K39/25;C12N7/00
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司
• 代理人: 譚明勝

1.含有減毒水痘-帶狀皰疹病毒的疫苗的使用方法，該方法包括施用免疫有效量的疫苗以預防水痘，所述病毒是用如下方法制備的：

a.在足以使細胞高度復制的高營養條件下，將選自人二倍體細胞的VZV易感染細胞培養至在單層培養物中會合，并供給不能代謝的二糖；

b.在盡可能接近會合點時，用實用范圍內盡可能高感染復數的VZV感染細胞感染步驟(a)培養的細胞；

c.將VZV感染培養物在高營養狀態下維持22-96小時，并在感染性VZV產量達到峰值時收集；

d.在收集VZV感染細胞前，用任選含有溶酶體營養劑如氯化銨或氯喹的生理溶液洗滌VZV感染培養物；

e.將VZV感染細胞收集到最小體積的穩定溶液中，并且或者立即破碎細胞，或者冷凍這些細胞供以后破碎；

f.破碎VZV感染細胞以最適地釋放細胞結合的VZV，并除去細胞碎片，以提供無細胞VZV制備物；

其中VZV易感染細胞是MRC-5細胞，減毒VZV是水痘-帶狀皰疹病毒的Oka株，培養溫度是在30-37℃之間，二糖是以20-60mM提供的蔗糖；培養溫度是35℃，感染復數是1∶25和1∶625之間，溶酶體營養劑是以20-50mM提供的氯化銨或以230μM提供的氯喹。

2.含有減毒水痘-帶狀皰疹病毒的疫苗的使用方法，該方法包括施用免疫有效量的疫苗以預防水痘，所述病毒是用如下方法制備的：

a.培養VZV易感染細胞至會合，其中所說培養包括：

1)細胞植入期；

2)在實用范圍內盡可能大體積的基本培養基或較小體積的高營養培養基中進行的細胞生長期；

3)感染前期，包括使細胞與無毒的不能代謝的二糖接觸；

b.在盡可能接近會合點時，用實用范圍內盡可能高感染復數的減毒VZV感染細胞感染步驟a培養的細胞；

c.將VZV感染培養物維持于大體積的基本培養基或較小體積的加富培養基中22-96小時，達到峰值VZV產量；

d.在收集前用任選含有溶酶體營養劑的生理溶液洗滌VZV感染培養物；

e.用以下方法收集VZV感染培養物：

1)移出液體；

2)加入最小體積的穩定劑溶液；

3)刮落或用化學方法釋放VZV感染細胞；

4)任選地將釋放出的VZV感染細胞在-70℃下冷凍；

f.破碎釋放出的VZV感染細胞以最適地釋放細胞結合的VZV，并除去細胞碎片，并任選地凍干無細胞VZV或以液體冷凍形式貯存；

其中VZV易感染細胞是MRC-5細胞，減毒VZV是水痘-帶狀皰疹病毒的Oka株，培養溫度是在30-37℃之間，二糖是以20-60mM提供的蔗糖；培養溫度是35℃，感染復數是1∶25和1∶625之間，溶酶體營養劑是以20-50mM提供的氯化銨或以230μM提供的氯喹。

3.權利要求1的方法，其中高營養培養基是任選地添加0.02-0.4mg/ml大豆類脂的SRFE-2，并且病毒是通過聲波處理或DOUNCE勻漿或兩者并用而從細胞中釋放出來的。