[發(fā)明專利]單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂的高純度制備工藝

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 00133077.2
• 申請(qǐng)日: 2000-11-09
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN1353112A
• 公開(kāi)（公告）日: 2002-06-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 范開(kāi);王建;馬素永;張益;田峰;聶李亞;黃洪濤
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 重慶富進(jìn)生物醫(yī)藥有限公司
• 主分類號(hào): C07H15/10
• 分類號(hào): C07H15/10;C08B37/00
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

神經(jīng)節(jié)苷脂是一族異構(gòu)的含唾液酸殘基的結(jié)構(gòu)復(fù)雜的膜糖脂，其分子皆由一個(gè)疏水的神經(jīng)酰胺部分和一個(gè)親水的唾液酸寡糖基團(tuán)組成。神經(jīng)酰胺由鞘氨醇的氨基與脂肪酸酸化而成。神經(jīng)節(jié)苷脂分子既有水溶性，又有脂溶性。Sevennerholm按唾液酸殘基的位置和寡糖核心區(qū)的長(zhǎng)度，將神經(jīng)節(jié)苷脂分為不同的種類，其中GM1為單唾液酸四已糖神經(jīng)節(jié)苷脂。

哺乳動(dòng)物中樞神經(jīng)系統(tǒng)中神經(jīng)節(jié)苷脂含量豐富，其中以神經(jīng)系統(tǒng)灰質(zhì)含量最高。據(jù)估計(jì)，以水解后的唾液酸計(jì)算大腦中每克新鮮灰質(zhì)和白質(zhì)含量分別為3000-3500nM和1000-1250nM，明顯高于其他組織。中樞神經(jīng)系統(tǒng)的神經(jīng)節(jié)苷脂主要為神經(jīng)節(jié)系列，大腦灰質(zhì)多為GM1，GD1a，GD1b，(GD為二唾液酸神經(jīng)節(jié)苷脂)GT1b(GT為三唾液酸神經(jīng)節(jié)苷脂)，GQ1b(GQ為四唾液酸神經(jīng)節(jié)苷脂)，其次是GM2和GD3；白質(zhì)以GM1和GM4為主。神經(jīng)節(jié)苷脂在神經(jīng)元胞體中含量略低于平均水平，而在突觸小體中含量高于平均水平。對(duì)于單個(gè)神經(jīng)節(jié)苷脂而言，GT1，GD1b及GM1集中于突觸前后膜。神經(jīng)節(jié)苷脂位于神經(jīng)元細(xì)胞膜雙層結(jié)構(gòu)外層，神經(jīng)酰胺一端嵌入細(xì)胞膜內(nèi)，而寡糖鏈一端伸出細(xì)胞膜外突入外環(huán)境。神經(jīng)節(jié)苷脂的這種非對(duì)稱性分布以及它們的化學(xué)性質(zhì)差異使其特別易與各種細(xì)胞外信息發(fā)生相互反應(yīng)，從而在細(xì)胞膜活動(dòng)上充當(dāng)重要角色。實(shí)驗(yàn)證明外源性神經(jīng)節(jié)苷脂尤其是GM1能嵌入神經(jīng)細(xì)胞膜，模仿內(nèi)源性神經(jīng)節(jié)苷脂的某些功能，調(diào)節(jié)膜介導(dǎo)的細(xì)胞功能，并能刺激中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷后潛在的代替機(jī)制阻止損害的發(fā)展，保護(hù)未受損的神經(jīng)組織，同時(shí)還能影響體外培養(yǎng)的神經(jīng)元的生長(zhǎng)及其活性，促進(jìn)其存活及生長(zhǎng)。神經(jīng)節(jié)苷脂GM1在神經(jīng)系統(tǒng)中的主要生理作用為1，促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞的生長(zhǎng)，分化發(fā)育和神經(jīng)再生2，參與突觸傳遞，維持腦的正常機(jī)能，參與各種學(xué)習(xí)記憶活動(dòng)3，在細(xì)胞與細(xì)胞，細(xì)胞與微生物以及細(xì)胞與基質(zhì)間的相互作用過(guò)程中起介導(dǎo)作用4，調(diào)節(jié)細(xì)胞膜中各種蛋白質(zhì)功能，如離子通道，表皮生長(zhǎng)因子受體等。由意大利Fidia公司從牛腦組織中提取的GM1注射液(商品名Sygen)已于90年代正式在我國(guó)銷售。由于GM1能通過(guò)血腦屏障，注射后快速在大腦和脊髓組織中分散，因此臨床上GM1的治療效果十分顯著。主要用于治療人血管性或創(chuàng)傷性中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷。如腦卒中、急性脊髓損傷和腦外傷。

CM1的研究已有數(shù)十年，目前已證明其結(jié)構(gòu)組成和理化性質(zhì)，主要?dú)w結(jié)為：

1.GM1分子由一個(gè)唾液酸，一個(gè)葡萄糖，二個(gè)半乳糖，一個(gè)氨基半乳糖及一個(gè)神經(jīng)酰胺殘基組成。分子式為：

2，分子量：1551，鈉鹽為1574

3，性狀：為乳白色粉末，無(wú)味，有吸濕性，溶于水，甲醇-水及甲醇-氯仿溶液。不溶于甲醇，丙酮，氯仿，乙醚。熔點(diǎn)：207-230攝氏度。

4，紫外吸收最大波長(zhǎng)位于205nm有特殊的紅外吸收光譜，可通過(guò)氨基正相柱高效液相色和薄層色譜(TLC)進(jìn)行純度鑒定。氣相色譜可鑒定GM1分子中糖基和神經(jīng)酰胺殘基。

神經(jīng)節(jié)苷脂及GM1提取和分離純化已有文獻(xiàn)和專利報(bào)道。其主要提取方法是：豬腦或牛腦經(jīng)絞粹，用丙酮脫水制成丙酮粉。再用氯仿、甲醇、水混合有機(jī)溶劑提取[Svennerholm.et?al?Biochemical?et?Biophsica?Acta，617-109(1980)]。提取物神經(jīng)節(jié)苷脂轉(zhuǎn)入水相[J.Folch，The?Journal?of?Biological?Chemistry，226，497-509(1957)].用DEAE-Sephadex-A25純化[R.w.Ledeen，et?al.Journal?ofNeurochemistry，21，829(1973)].硅膠層析，GM1得率達(dá)到14％。神經(jīng)節(jié)苷脂的分離有用a環(huán)糊精技術(shù)(EP00469352A1)，也用大孔徑樹(shù)脂吸附技術(shù)(CN85102590)。神經(jīng)節(jié)苷脂脫唾液酸方法有用唾液酸酶處理法(Richard?Kuhn，etal.，ChemischeBerichte，1963.96.866).有用加熱處理法(US4868292)以及微生物處理方法(FukanoY，et?al.，Appl?Environ?Microbiol，1997.63.1861)。GM1純化方法Momoi?TaKashi建立了陰離子交換層析技術(shù)(Biochim?Biophys?Acta，1976，411，488)。親和層析技術(shù)(Krishna?Kant，et?al?J.Chromato，1989.494：289)等。